1 材料与方法

    1.1 主要仪器

    X100冷冻高速离心机(HITACHI)、LP型低压层析系统(BIO-RAD)、2000C微量紫外可见光检测仪(Thermoscientific)、F-4600荧光分光光度计(Hitachi)、2500+蓝光凝胶分析仪(上海天能)、5500multi+RGB全自动化学发光荧光图像分析仪(上海天能公司)。

    1.2 主要试剂

    Ⅳ型胶原抗体(本实验室制备)、Sephadex G25凝胶填料(GE)、异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)(Sigma公司)、其他试剂均为国产试剂。

    1.3 FITC标记Ⅳ型胶原抗体的制备和纯化

    采用透析法标记、凝胶过滤法纯化[6-7]。取抗体溶液10mL，抗体含量为9mg，充分溶解。15000g/min，4℃，离心20min。弃上清，沉淀溶解于4mL pH9.8 NaHCO3缓冲液中，吹打混匀，溶液置透析袋中对上述缓冲液，4℃，透析6h，期间3次更换透析外液，透析过程在轻柔搅拌中进行。透析结束，透析内液5000g/min，4℃离心20min。取上清 ......