真核表达载体pEGFP—N1—kin17的构建及其在Zmpste24—/—小鼠胚胎成纤维细胞内的表达(1)

http://www.100md.com 2014年7月1日 郑慧玲 崔红晶 余磊等

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     [摘要]目的 构建人kin17基因真核表达载体pEGFP-N1-kin17，将载体转染至野生型及Zmpste24基因缺失的小鼠胚胎成纤维上皮细胞，荧光显微镜观察kin17蛋白表达情况。 方法 用高保真DNA 聚合酶，从pCMV-kin17载体中扩增获取人kin17 cDNA编码序列，将其克隆至pEGFP-N1载体中，经酶切、连接、转化后，挑取阳性克隆进行菌液进行PCR、菌液质粒双酶切及测序鉴定；将成功构建的GFP-kin17表达载体转染Zmpste24-/- MEFs，荧光显微镜观察kin17蛋白的核定位情况。 结果 pEGFP-N1-kin17转化细菌克隆测序结果完全正确；将载体转入MEFs后，可以通过荧光显微镜观察到kin17蛋白的表达。 结论 成功构建GFP融合的kin17真核表达载体，该载体为kin17蛋白的研究提供工具。本实验中载体pEGFP-N1-kin17在野生型和Zmpste24-/- MEFs中均成功表达。

    [关键词] kin17；GFP；Zmpste24；小鼠胚胎成纤维细胞

    [中图分类号] R346 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2014)13-34-05

    [Abstract] Objective To construct the kin17 GFP fusion eukaryotic expression vector and explore the expression and location of kin17 in Zmpste24-/- mouse embryonic fibroblasts (MEFs) ......

    http://www.100md.com/html/paper/2095-0616/2014/13/08.htm

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