中药白头翁对体外大肠杆菌生物膜抑制作用研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1 材料与方法
1.1 菌株
大连医科大学第一附属医院检验科2011年6～12月临床分离得到的30株大肠杆菌。
1.2 仪器
Φ30培养皿(由上海五一玻璃仪器厂提供)；96孔板(美国costar公司产品)；盖玻片(江苏世泰实验器材有限公司)；6孔板(美国costar公司产品)；NUAIRETM US AUTOFLOW型CO2培养箱(德国NUAIRE公司)；OLYMPUS显微摄影系统(日本OLYMPUSBX51配DP72)；SUNBRISE酶标仪(瑞士Tecan公司)等。
1.3 药物与试剂
白头翁药材购于药房，白头翁水煎液和醇提取物按文献方法制备[3]；2.5%戊二醛；氯化钙；硝酸银；硫代硫酸钠；对苯二酚；二甲基亚砜(DMSO)；四甲基偶氮唑盐(MTT)；LB培养液(氯化钠5g/L，酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，自配)；pH 7.4磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾6.8g/L，氢氧化钠1.164g/L，自配)；生理盐水。
1.4 方法
1.4.1 LB培养液-Φ30培养皿系统EBF体外模型的建立 参照文献方法[4]并进行改进，将大肠杆菌的单克隆细菌增殖培养的菌液稀释20倍，取两个Φ30培养皿，一个加入4mL稀释菌液作为试验组，另一个加入4mL LB培养液作为空白对照，置于37℃恒温培养箱培养24h后，取出，银染法观察大肠杆菌EBF形成过程[5]；生理盐水充分漂洗去除浮游菌；2.5%戊二醛PBS溶液固定1h；蒸馏水清洗1min；饱和氯化钙溶液结合15min；蒸馏水漂洗1min；5%硝酸银溶液反应15min；1%对苯二酚溶液显色2min；蒸馏水漂洗1min；5%硫代硫酸钠溶液固定2min；蒸馏水漂洗1min；光学显微镜20×10倍下观察大肠杆菌生物膜在培养皿上的形成情况 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。