甲磺酸伊马替尼联合塞来昔布对胃肠间质瘤细胞增殖及凋亡的影响(2)
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1.3?MTT检测细胞生长抑制率
取对数生长期细胞制备细胞悬液，以1×104个/孔浓度接种细胞至96孔板中，常规培养24 h，分别加入含塞来昔布的PRMI1640培养基，浓度分别为0.1、1、10、100、1 000 μmol/L，同时设阴性对照组和空白组，每个梯度设3个复孔。继续培养72 h后，每孔加入MTT溶液100 μL，4 h后离心，弃去孔中液体，加入DMSO150 μL/孔，10 min后，应用全自动酶标仪，于570 nm波长处测定吸光度(A)值，计算生长抑制率，绘制细胞生长抑制曲线，计算塞来昔布抑制GIST-T1细胞增殖的药物半效抑制浓度(IC50)。
将处于对数生长期的GIST-T1细胞接种于96孔板中，常规培养24 h，分别加入含塞来昔布(10μmol/L)、甲磺酸伊马替尼(10μmol/L)以及塞来昔布(10μmol/L)联合甲磺酸伊马替尼(10μmol/L)的培养基，继续培养72 h后，每孔加入MTT溶液100 μL，4 h后离心，加入DMSO 150μ /孔，应用全自动酶标仪测定吸光度(A)值，按下述公司计算细胞生长抑制率：生长抑制率=(A对照组-A实验组)/(A对照组-A空白组)×100%。
1.4?Western blot检测Bax/ Bcl-2蛋白水平表达
分别收集实验组与对照组细胞提取总蛋白，通过聚丙烯酸胺凝胶电泳分离蛋白样本。将蛋白样本转移至PVDF膜上，蛋白封闭液37℃封闭1 h，PBST洗涤，分别用鼠抗人Bax、Bcl-2单克隆抗体(1︰1 000) 4℃振荡孵育过夜，TBST洗涤3次 ......
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