姜黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用(2)
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参见附件。
1.2?四甲基偶氮唑蓝( MTT)实验
实验分组：(1)姜黄素10、20、40、60、80 μmol/L组；(2)阳性对照药物顺铂10、20、40、60、80 μmol/L组；(3)等量DMSO为空白对照组。消化对数生长期的PC-3细胞，制成5×104/mL细胞悬液，接种于96孔平板。每孔加入5×103细胞悬液，置于37℃5%CO2条件下培养24 h，使细胞贴壁，按上述分组分别加入不同浓度的姜黄素和顺铂200 μL，培养24 h，后取出96孔板，加0.5%MTT液20 μL入培养液中，4 h后吸出培养液，加入200 μL二甲基亚砜(DMSO)，20 min后酶标仪测定490 nm波长处的光密度值(D值)，实验重复3次，设复孔3个，检测各组细胞的抑制率，计算中效浓度。再以中效浓度的姜黄素和顺铂分别作用于PC-3细胞0、12、24、48 h后，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，计算出作用不同时间的增值抑制率。细胞增殖抑制率=(对照孔D值-实验孔D值)/对照孔D值×100%。
1.3?流式细胞仪检测细胞周期
取对数生长期PC-3细胞，制成5 ×105/mL浓度的细胞悬液，接种于24孔板。24 h后更换培养液，分别加入浓度为60 μg/mL的姜黄素、顺铂，在24 h后分别消化各组细胞，制成细胞悬液，PBS溶液洗涤2次，加入70%冷乙醇，4℃固定24 h，将制备好的单细胞悬液离心(1 000 r/min，10min)，弃去固定液，冷PBS漂洗2次(1 000 r/min，5 min)调整细胞密度为1×109/L，加入PI染液30 min，避光染色，消化后的细胞悬液用300目的尼龙膜过滤，收集细胞后用流式细胞仪检测细胞周期。
1.4 统计学分析
采用SPSS13.0统计软件包进行统计处理 ......
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