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编号:13046843
LAIR—1与TGF—β在口腔扁平苔藓患者外周血中表达的相关性研究(2)
http://www.100md.com 2017年6月15日 《中外医学研究》 2017年第17期
     1.2.2 流式细胞术检测法 利用该检测法检测LAIR-1在CD4+Foxp3+Treg上的表达情况,即有效采集两组人员的新鲜外周血进行肝素抗凝,后用PBSA(含有0.6%抗凝剂的ACD-A的PBS)以1∶1的比例对采集到的外周血进行稀释处理,并用Ficoll密度梯度法来分离出采集外周血的单个核细胞;进行细胞计数,并将其细胞密度调整到1.2×106细胞/ml,同时灭活血清,封闭FcR,而后分别应用PE-CY5-CD4与PE-LAIR-1mAb与同型对照抗体实施表面荧光染色处理,并于室温下避光孵育约20 min[2];将PBS洗涤之后,对细胞进行固定破膜,同时选用FITC-Foxp3 mAb与同型对照抗体实施膜内染色处理,同样于室温下避光约孵育30 min,最后在洗涤破膜缓冲液之后,加入500 μl固定液,并借助上流式细胞仪实施相应检测[3]。

    1.2.3 ELISA检测法 采用ELISA檢测法对采集外周血中TGF-β水平进行检测,即借助EDTA抗凝采血管采取两组人员的1 ml外周血,对其进行离心处理,后取其血浆放于-70 ℃的温度下进行保温处理,然而参照HumanTGF-β预包被ELISA试剂盒的说明书所说进行操作,借助ELISA双抗体夹心法来对细胞因子TGF-β表达水平进行有效检测,并采用全自动酶标仪450 nm处检测其A值[4]。

    1.3 结果判定

    LAIR-1与TGF-β均以细胞浆内不同程度棕黄色颗粒的出现情况来判定其阳性反应 ......
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