壁虎粉提取物对HL-60细胞增殖和凋亡的影响研究(2)
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参见附件。
1.2.5 DNA片段原位末端标记法(TUNEL)测定细胞凋亡 将0、0.125、0.25、0.5 g/ml浓度的壁虎粉药液作用48 h后的HL-60细胞800 g/min离心5 min，收集细胞，PBS洗涤，将细胞涂片用4%多聚甲醛室温下固定15 min，用PBS洗涤5 min，加0.1%的细胞穿透液Triton X-100，室温放置15 min后再用PBS洗涤两次，每次5 min。加入50 μl DNA末端反应液(以不加TdT酶溶液的反应溶液用为实验本底对照)，置37 ℃孵育60 min。用PBS洗涤2次后加入红色荧光标记的二抗，于37 ℃孵育60 min，PBS洗涤3次后再用DAPI复染，荧光镜下观察高倍视野计数500个细胞。以细胞内有红色荧光的为凋亡细胞，凋亡率=凋亡细胞数/总细胞数×100%。
1.3 统计学处理
所得数据采用SPSS 10.0统计软件处理，以(x±s)表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 壁虎粉抑制白血病HL-60细胞增殖
以0、0.062 5、0.125、0.25、0.5 g/ml浓度的壁虎粉分别处理白血病细胞株HL-60细胞1~3 d后，MTT法检测细胞增殖情况，结果显示壁虎粉呈浓度和时间依赖性抑制细胞增，见图1。0.062 5、0.125 g/ml壁虎粉对HL-60细胞的作用微弱，0.25、0.5 g/ml作用48 h后，HL-60细胞呈现明显的增殖抑制。
2.2 壁虎粉对HL-60细胞周期的影响
利用流式细胞术检测HL-60细胞内DNA含量分析，发现0.25和0.5 g/ml浓度的壁虎粉提取物作用HL-60细胞48 h后，HL-60细胞的细胞周期分布发生明显的变化，与对照组相比，主要表现为G0/G1期细胞比例增加，DNA合成期(S期)细胞比例明显减少，见图2和表2，并呈现出剂量依赖性(P<0.01)。这个结果说明壁虎粉提取物将HL-60细胞阻滞于G0/G1期，并且这种作用随着壁虎粉提取物浓度的增加而增强 ......
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