【摘要】启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列。它对基因的表达调控起着至关重要的作用。本文对真核生物启动子的鉴定方法作了简要的总结，并对其优缺点进行了比较。

    【关键词】真核；启动子；表达调控；RNA

    中图分类号R318.04文献标识码B文章编号1674-6805(2012)08-0154-02

    在原核生物中，RNA多聚酶结合的位置即为启动子[1]。但在真核生物中，启动子一直没有明确的概念，一般认为启动子是位于基因编码区上游，与RNA聚合酶相互识别、结合并启动转录的DNA序列，它包括在起始位点附近直接活化或抑制转录的DNA序列元件。启动子的定位是研究转录起始调控模式的前提，能否对其精确定位是后续功能性分析成败的关键[2]。本文对真核启动子的鉴定方法进行了简要的综述，并比较了优缺点。

    1S1核酸酶法

    S1核酸酶法[3]由Arnold Berk和Philip Sharp于1977年创立，近年来关于该方法的优化有许多报道[4-5]。其基本原理是首先构建噬菌体M13衍生型质粒，该质粒包括含有假定转录起始位点和其下游的部分核苷酸的基因区域、限制性酶切位点。将引物和单链噬菌体DNA进行退火，加入Klenow和dNTPs，其中一种dNTP经放射性标记，以产生放射性标记的探针。利用限制性内切酶将DNA切割成线形，通过变性凝胶电泳分离放射性探针，再将探针和分离到的mRNA进行杂交。然后用S1核酸酶进行消化，单链RNA和DNA被消化，生成含有部分核苷酸的双链片段 ......