1 材料与方法

    1. 1 主要药物及试剂 人肝癌Bel-7402细胞株(上海冠导生物工程有限公司);ADM(湘潭嘉叶源生物科技有限公司);胎牛血清(FBS)(北京雅安达生物技术有限公司);细胞裂解液(北京智杰方远科技有限公司);聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜)(上海邦景实业有限公司);预染标准分子量蛋白 (上海谷研实业有限公司)。

    1. 2 实验模型制备及分组 取对数生长期人肝癌Bel-7402细胞， 0.25%胰酶消化， 1000 r/min离心3 min后收集细胞。在37℃、5% CO2、0.1 μmol/L浓度ADM条件下染毒1 h后， 0.25%胰酶消化， 1000 r/min离心3 min收集细胞， 在不加ADM培养瓶中继续接种培养。重复以上步骤， 逐渐提高ADM药物浓度至1 μmol/L浓度， 细胞仍能稳定良好生长即肝癌耐药Bel-7402/ADM造模成功。将正常Bel-7402设为对照组， Bel-7402/ADM设为耐药组。

    1. 3 观察指标 采用免疫印迹(Western Blot， WB)检测P-gp表达水平， 取正常人肝癌Bel-7402及Bel-7402/ADM细胞 ......