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编号:13107843
晚期肺癌外周血调节T细胞及CD8+T细胞表面PD—1表达的关系(2)
http://www.100md.com 2017年9月15日 《中国实用医药》 2017年第26期
     1. 3 测定方法

    1. 3. 1 样品收集 抗凝全血2 ml摇匀;取两个1.5 ml EP管中分别加入100 μl全血, 其中一管作为NC对照不加抗体, 其余操作步骤一致;实验管中加入细胞表面抗原抗体CD4、CD8、CD25、CD279后混匀, 室温避光孵育20 min;加入1 ml 1×BD PharmLyse红细胞裂解液, 稍微涡旋, 37℃温箱避光孵育10 min裂解红细胞;500×g离心6 min;弃去上清, 加入1 ml 磷酸缓冲盐溶液(PBS)重悬细胞, 500×g离心5 min;弃去上清, 加入400 μl PBS重悬细胞。

    1. 3. 2 T 细胞亚群检测 按照流式细胞仪C6(BD)操作手册开机, 调试仪器, NC对照圈取淋巴细胞群, 画门P1收集至少6000个细胞;实验管对比NC管圈取CD4(APC)阳性, SSC-APC CD4阳性门内15000个细胞。

    1. 4 統计学方法 采用SPSS22.0统计学软件对数据进行统计分析 ......
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