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编号:13071775
兔骨髓基质干细胞的培养、鉴定及标记的实验研究(2)
http://www.100md.com 2016年11月15日 《中国实用医药》 2016年第32期
     1. 2. 3 BrdU标记骨髓基质干细胞的体外研究 选择处于对数生长期的骨髓基质干细胞开展细胞爬片, 等到细胞生长到一半时加入BrdU, 待2 d后取出玻璃片用PBS 0.01 mol/L洗涤, 运用多聚甲醛固定好后开展免疫组化和免疫荧光染色, 最后封面进行观察。

    1. 2. 4 BrdU标记骨髓基质干细胞的体内研究 在幼兔颅内注射经过BrdU标记的骨髓基质干细胞, 3周后脱颈处死并取出脑, 在穿刺点附近开展石蠟切片后开展免疫荧光染色。具体步骤为:首先, 常规脱蜡至水, 分别用30 ml/L 过氧化氢(H2O2)、2 mol/L 氯化氢(HCl)、4 g/L的胃蛋白酶、10 g/L

    牛血清白蛋白室温封闭约10 min, 加入2 mol/L HCl, 室温下孵育30 min, 再将4 g/L的胃蛋白酶室温孵育30 min, 然后兔抗BrdUmAb(1∶100)在湿盒中孵育过夜, 温度为4℃;然后将TRITC标记抗兔免疫球蛋白G(IgG)(1∶100)在室温下孵育40 min, 最后在用PBS和蒸馏水洗涤, 封片观察[13-16] ......
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