银黄注射液刺激性\过敏性和溶血性试验研究
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【摘要】目的观察银黄注射液是否具有血管刺激性、过敏性和溶血性。评价其注射用药的安全性。方法通过兔耳缘静脉刺激性试验、豚鼠全身主动过敏性试验(ASA)和大鼠被动皮肤过敏试验(PCA)、体外溶血性试验观察银黄注射液的安全性。结果银黄注射液对家兔耳静脉和肌肉有轻微的刺激性；豚鼠全身主动过敏性试验无动物出现过敏症状；在大鼠被动皮肤过敏试验中仅高剂量组25%动物出现过敏反应症状；对家兔血细胞无溶血和凝集反应。结论在本次实验条件下除银黄注射液低高剂量组有轻微过敏反应症状外，其注射使用是安全的。
【关键词】银黄注射液；血管刺激；豚鼠全身主动过敏性试验；大鼠被动皮肤过敏试验；体外溶血
作者单位：276000山东省临沂市人民医院银黄注射液收载于(卫生部药品标准)中药成方制剂第十九册197页。是由金银花提取物、黄芩苷组成。具有清热、解毒、利咽之功效，临床用于风热犯肺所致发热、咳嗽、咽痛等症。上呼吸道感染，急性扁桃体炎，咽炎等见上述症候者，临床疗效可靠。本研究对银黄注射液的相关毒性进行试验，为临床安全用药提供参考依据。
1材料
11药物银黄注射液由四川三精升和制药有限公生产，每支装2 ml,内含绿原酸25 mg,含黄芩甙40 mg。生理盐水由山东临淄制药厂生产。卵蛋白由上海伯奥生物科技有限公司生产。
12动物新西兰家兔，体重2~25 kg，雌雄各半，青岛康大食品有限公司，动物生产合格证号：SCXK(鲁)20070023，普通级；一级白色豚鼠，体重300~400 g，由山东省卫生防疫站提供，动物合格证号为鲁动质字20020603；Wistar大鼠，体重120～180，雌雄各半，购自山东鲁抗医药股份有限公司实验动物室，合格证号：SCXK(鲁)20050017。
2试验方法
21肌肉刺激试验兔4只，雌雄各半，剪去兔两腿外侧毛，75%的乙醇消毒后，每只兔左腿股四头肌内注射2 mg/ml银黄注射液1 ml，右腿股四头肌内注射生理盐水1 ml注射后48 h处死动物，解剖取出两侧股四头肌，纵向切开，观察注射局部刺激反应。按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》对局部进行评分(表1)。取局部组织标本进行病理组织学检查。
22血管刺激试验兔6只，雌雄各半，每只兔左耳静脉滴注2 mg/ml的银黄注射液，给药体积15 ml/kg，给药速度1~2 s/滴；右耳静脉滴注生理盐水，给药体积和给药速度同试验组。注射后48 h处死动物，解剖取注射部位进行病理组织学检查。
23全身主动过敏试验取健康雄性豚鼠24只，随机分为4组，分别为银黄注射液高剂量组、低剂量组、阳性对照组和生理盐水对照组，每组6只。银黄注射液高剂量组为72 mg/kg，低剂量组为24 mg/kg；阳性对照组为牛血清白蛋白，剂量为3 mg/只；阴性对照组给予等体积的生理盐水。隔日腹腔注射相应的药液，共3次。末次注射后第10天快速静脉给药激发，激发时剂量、体积翻倍。按表2进行过敏反应评价。
表1肌肉刺激反应分级标准
反应级刺激反应0无明显变化1轻度充血，其范围在05~10 cm以下2中度充血，其范围在05~10 cm以上3重度充血，伴有肌肉变性4出现坏死，有褐色变性5出现广泛性坏死表2过敏反应症状评价表
序号症状反应分级序号症状反应分级0正常11呼吸困难+++1不安+12鼾音+++2竖毛+13紫绀+++3颤抖+14步态不稳+++4搔鼻+15跳跃+++5喷嚏++16喘息+++6咳嗽++17痉挛+++7呼吸急促++18侧卧+++8排尿++19潮式呼吸+++9排粪++20死亡++++10流泪++备注：过敏反应阴性 +过敏反应弱阳性 ++过敏反应阳性
+++过敏反应强阳性++++过敏反应极强阳性
24被动皮肤过敏试验取健康大鼠8只，随机分为4组，分别为受试药物高剂量组、低剂量组、阳性对照组和阴性对照组，每组2只。银黄注射液高剂量组为270 mg/kg；低剂量组为27 mg/kg；阳性对照组为卵白蛋白，剂量为75 mg/kg；阴性对照组给等体积的生理盐水。各组隔日腹腔注射相应的药液，共注射五次。末次致敏注射后第10天采血，2000转/min离心10 min，分离血清，20℃保存，两周内备用。另取16只大鼠随机分为4组，分组同致敏试验。大鼠两侧背部剪毛，面积约3×4 cm。上述各组抗血清与生理盐水以1∶2和1∶10稀释。各组在预先剪毛的背部皮肤左侧皮内注射1∶2的抗血清01 ml，右侧皮内注射1∶10的抗血清01 ml。24 h后各组静脉注射与致敏剂量相同的药液加等量的1%伊文斯兰染料共1 ml。30 min后麻醉处死各组动物，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小，直径大于5 mm者为阳性。
25溶血试验①2%红细胞混悬液的制备：取兔血10 ml，放入盛有玻璃珠的灭菌三角瓶中振摇10 min，使成脱纤血液。加90 ml生理盐水，摇匀，分装于离心管中，1000转/ min离心10 min，去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水如上洗数次，直至上清液不显红色，弃去上清液，将所得红细胞用生理盐水配成2%的混悬液，待用。②加液：取试管7支，编为1、2、3、4、5、6、7号，每管分别加2%红细胞混悬液25 ml,然后对1~7号管分别按序号加生理盐水20、21、22、23、24、25、0 ml，混匀后置于37℃培养箱中温浴30 min后，1~6管分别加10 mg/ml的银黄注射液药液05、04、03、02、01、0 ml，7管加蒸馏水25 ml(表3)，匀后置37℃恒温箱中。③观察：分别于15 min、30 min、45 min、60 min、120 min、180 min和240 min观察溶液上层是否呈透明红色的溶血现象，或是否有棕红色和红棕色絮状沉淀(红细胞凝集现象)。
表3溶血试验各管加样量
ml试管编号12345672%红细胞混悬液25252525252525生理盐水202122232425受试物0504030201蒸馏水〖8〗253结果
31肌肉刺激试验试验组：肉眼观察发现4块股四头肌中，有3块肌肉有轻度充血, 其范围小于05×1 cm，有1块肌肉无明显变化。根据刺激反应中反应级的分值计为分3。镜下见肌纤维结构基本正常，部分区域见局灶性出血和肌纤维坏死灶，伴有嗜中性粒细胞、淋巴细胞及组织细胞浸润。阴性对照组：肉眼观察4块肌肉中有1块肌肉有轻度充血，另3块肌肉未见明显改变，根据刺激反应中反应级的分值计为1分。镜下见局灶性出血，未见炎细胞浸润以及肌纤维的变性坏死。
32血管刺激试验试验组动物静脉血管内皮细胞增生，血管壁增厚，部分血管内皮增生。
33全身主动过敏试验阳性对照组6只豚鼠出现咳嗽、打喷嚏、排尿、痉挛后死亡；生理盐水对照组、银黄注射液高剂量组和低剂量组的动物均未发现过敏反应现象。
34被动皮肤过敏试验阳性对照组4只均出现蓝色斑点 ......
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