HPLC-ELSD法测定复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量
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【摘要】 目的 建立复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法。方法 以乙腈∶水(30∶70)为流动相，Agilent Hypersil ODS C18柱 (4.0 mm 125 mm，5 μm)为固定相，流速为1.0 ml/min；漂移管温度：45℃，氮气流速：1.5L/min。结果 黄芪甲苷在1.832~18.32 μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为96.45%，RSD为1.16%。结论 该方法准确、重现性好、灵敏度高，可用于复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量测定。
【关键词】 黄芪甲苷；高效液相色谱法；含量测定
Determination of the content of astragaloside Ⅳ in Fufangqidan Capsules by HPLC-ELSD
【Abstract】 ObjectiveTo determine the content of Astragaloside Ⅳ in Fufangqidan capsules by HPLC-ELSD. Methods Agilent Hypersil ODS C18column was used with acetonitrile-water(30:70) solution as the mobile phase, the flow rate was 1.0 ml/min； drift tube temperature was 45℃, nitrogen flow rate was 1.5L/min. Results The calibration curves were linear within1.832~18.32 μg for Astragaloside Ⅳ. The average recovery was 96.45% with RSD 1.16% respectively. ConclusionThe experimental result shows that the method was simple, sensitive and reliable，and could be used as the quality determination of Astragaloside Ⅳ.
【Key words】 Astragaloside Ⅳ； HPLC；Quality determination
复方芪丹胶囊主要由黄芪、丹参等多味药物组成，具有益气养阴，活血祛瘀的作用。制剂中成分较复杂，黄芪为方中君药，本文采用高效液相色谱法对该制剂中黄芪的有效成分黄芪甲苷进行含量测定，探讨该方的质量控制方法。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪(美国)；Alltech 3300 蒸发光散射检测器(美国Grace)；Mettler-Toledo XS205 dU电子分析天平(瑞士)；Agilent Hypersil ODS C18(4.0 125 mm，5 μm)色谱柱。乙腈为色谱纯试剂(Merck)，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。黄芪甲苷对照品购于中国食品药品检定研究院，批号: 110781-200613，复方芪丹胶囊及其空白制剂为本单位自制，批号:100701，100702，100703。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Hypersil ODS C18柱(4.0 mm×125 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(30∶70)；流速:1.0 ml/min；柱温:35℃；漂移管温度：45℃；氮气流速：1.5 L/min。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含黄芪甲苷分别为0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 胶囊内容物研细，取约5 g，精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40 ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10 ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40 ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40 ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5 ml使溶解,放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm.柱高为12 cm),以水50 ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 ml洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇80 ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得[1,2]。
2.4 线性范围的考察 分别精密吸取不同浓度黄芪甲苷对照品溶液(每1 ml中含黄芪甲苷分别为0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg)10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积(Y)的自然对数为纵坐标，以黄芪甲苷含量(X)的自然对数为横坐标进行线性回归，得标准曲线lnY=1.57437nX+4.8125，r=0.99992。表明黄芪甲苷在1.832~18.32 μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液(0.9160 mg/ml)10 μL分别进样6次，测得峰面积积分值RSD为0.47%(n=6)，表明方法的精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号:100701)10 μL分别于0，1，2，4，6，8 h进样，测定峰面积，结果RSD为1.19%(n=6)，表明供试品在8 h内稳定。
2.7 重复性试验 取同一供试品(批号:100701)6份，分别精密称定，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算含量，RSD为1.26%，表明方法的重复性良好。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品，分别精密加入一定量的黄芪甲苷对照品，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定，测得平均回收率为96.45%，RSD为1.16%(n=6)。结果见表1 ......
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