多器官功能障碍大鼠胰腺腺泡细胞超微结构和功能的改变(2)
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1.3 观察指标的检测方法
1.3.1 胰腺组织电镜标本制备与观察 在动物开腹后,未停止心跳前,切取靠近胰尾的胰腺组织,大小约1 mm3,在1 min内浸泡于3%戊二醛预固定,避免胰酶破坏胰腺组织结构。再予以1.5%多聚甲醛前固定,1%锇酸 1.5%亚铁氰化钾后固定,酒精 丙酮脱水,环氧树脂618包埋剂包埋;超薄切片,醋酸铀、柠檬酸铅染色,透射电镜观察、摄影。
1.3.2 免疫组化法检测胰岛Bax蛋白的表达,操作严格按照说明书进行,在我院病理科主任指导下观察胰岛细胞Bax蛋白的表达,结果采用计算机彩色图像分析仪对棕褐色阳性物质进行定量分析。
1.3.3 胰腺组织病理学标本制备与观察 开腹取标本后,经HE染色,在我院病理科主任指导下观察胰腺组织病理改变。
1.3.4 血清胰淀粉酶、脂肪酶的测定 胰腺淀粉酶采用酶联免疫吸附测试,血清脂肪酶采用分光光度计比色测试,操作严格按照试剂说明书进行。
1.4 统计学分析
资料以均数±标准差(x±s)表示,两组大鼠血清胰淀粉酶、脂肪酶、Bax蛋白定量的比较用成组t检验,统计学处理采用SPSS 16.0for Windows统计软件包完成,P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为差异有显著统计学意义。
2 结果
2.1 MODS组大鼠血清胰淀粉酶、脂肪酶明显升高,其中血清胰淀粉酶平均升高近2倍,脂肪酶升高达3倍余,和正常对照组比较有显著统计学意义(P<0.01)(见表1)。
2.2 Bax蛋白在胰腺腺泡细胞胞浆中表达,呈棕褐色。在MODS组可见Bax蛋白出现高表达,其灰度值和正常对照组比较,有显著统计学意义(P<0.01)(见图1)。
2.3 光镜下,正常对照组大鼠胰腺细胞结构完整、清楚,间质无炎性细胞浸润。MODS组大鼠胰腺腺泡细胞呈空泡变性,胰腺被膜下充血、水肿、增厚,见急慢性炎症细胞浸润,小叶间间隔扩张,部分腺泡间隔扩张,间质血管充血,导管周围有炎症细胞浸润(见图2)。
2.3 透射电镜下胰腺组织超微结构的变化 正常组大鼠胰腺腺泡细胞核仁正常,腺泡细胞胞质内可见线粒体、粗面内质网、高尔基体,分泌颗粒多而大,腺泡腔见微绒毛正常(见图3) ......
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