知芪益肾汤对实验性糖尿病大鼠肾功能的作用机制研究
糖尿病肾病,转化生长因子β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)
 |
| 第1页 |
参见附件。
【摘要】 目的探讨知芪益肾汤对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的保护作用及其发生机制。方法 腹腔注射链尿佐菌素(STZ)建立糖尿病模型,检测血糖、UAER、Ccr,应用免疫组化法检测CTGF及TGF-β1的蛋白表达。结果 知芪益肾汤组UAER、Ccr显著低于糖尿病组(P<0.01),且肾脏CTGF及TGF-β1阳性表达相对面积较糖尿病组明显下调(P<0.01)。结论 早期应用知芪益肾汤对STZ诱导的糖尿病大鼠有肾保护作用。
【关键词】 糖尿病肾病;知芪益肾汤;转化生长因子β1(TGF-β1);结缔组织生长因子(CTGF)
糖尿病(DM)患者30%～40%可发生糖尿病肾病(DN)。细胞外基质(ECM)在肾小球系膜区及间质的进行性积聚是DN发生的重要环节,从而导致肾小球纤维化硬化[1] 。近年来转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF )的介导作用已引起广泛的关注,认为其可能为DN发病机制的最后共同通路。
1 材料
1.1 主要药物和试剂 二月龄雄性Wistar大鼠60只(体质量180 ～220 g),链尿佐菌素(STZ)(美国sigma公司生产)、兔抗大鼠TGF-β1及CTGF多克隆抗体(santa cruz公司产品)、spkit即用型及DAB显色试剂盒、中药(由黄芪、知母、山药等组成)。
1.2 仪器 美国邦培血糖仪、Olympus AU-1000全自动生化分析仪、Olympus CH30显微镜、 德国Leica RM2145石蜡切片机。
2 方法
2.1 模型的建立及分组给药 健康雄性Wistar大鼠适应性饲养7 d,禁食12 d后按60 mg/kg的剂量左下腹腔一次性注射STZ诱导糖尿病模型,72 h后取尾静脉血测血糖和尿糖,于第8周末,每组大鼠收集24 h尿液计量检测尿白蛋白定量,称重后,肾脏取皮质固定于10%中性福尔马林中、石蜡包埋、制成4 μm厚切片。大鼠经眼内眦取静脉血测血胆固醇、三酰甘油、血肌酐。
2.2 观察指标及其检测方法 给药8周后测空腹血糖; 检测糖化血红蛋白,血胆固醇、三酰甘油、血肌酐,检测 24 h尿微量白蛋白、计算内生肌酐清除率(Ccr),尿白蛋白排泄率(UAER)。
2.3 免疫组化检测 取固定好的石蜡切片,常规脱蜡、水化,用3%H2O2室温15 min灭活内源性过氧化物酶、微波加复合蛋白酶修复暴露抗原,滴加正常免血清封闭液,室温10 min滴加稀释的一抗(1∶100)4℃过夜,滴加生物素化二抗37℃ 15 min,DAB显色,苏木素轻度复染脱水透明中性树脂封片,显微镜观察 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。