HIF-1α基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定(1)
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【摘要】 目的 构建HIF-1α基因RNA干扰慢病毒载体。方法 选定HIF-1α基因RNAi靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoⅠ和HpaⅠ双酶切后的慢病毒载体pLentilox3.7(pLL3.7)连接,产生pLL3.7 HIF-1α慢病毒载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,抽取质粒后,用限制性内切酶XbaⅠ和NotⅠ进行酶切鉴定,将阳性克隆送金斯特公司进行测序鉴定;用PHR、pVSVG和pLL3.7慢病毒载体共转染包装细胞293T细胞(磷酸钙转染法),包装产生慢病毒, 将收集的病毒上清经高速离心浓缩后,按一定比例稀释,然后感染293T细胞,用流式细胞仪检测293T细胞GFP蛋白的表达水平,从而测定病毒滴度。结果 酶切和测序证实,构建出HIF-1αshRNA的慢病毒载体pLL3.7 HIF-1α;包装慢病毒,测得离心的浓缩病毒悬液的滴度为2×108 TU/ml。结论 成功构建HIF-1α基因RNAi慢病毒载体。
【关键词】 HIF-1α,RNAi,慢病毒
Construction and Identification of HIF-1αRNAi Lentiviral Vector
SHEN Shang-hang, WANG Zhan-xiang, CHEN Yu-ying,et al.
Department of Neurosurgery, First Hospital of Xiamen Affiliated to the Fujian Medical University, Xiamen 361003,China
【Abstract】 Objective To construct a lentiviral vector of RNA interfered(RNAi)HIF-1αgene ......
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