银杏叶提物对肝癌细胞生长株、甲胎蛋白分泌及γ-GT活性的影响(1)
【摘要】 目的 研究银杏叶提物(EGb)对肝癌细胞生长、甲胎蛋白(AFP)分泌及γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性的影响。方法 以两种人肝癌细胞株SMMC-7721 细胞和Bel-7402细胞分别与EGb(17.5~105mg/d)共培养6 d,利用MTT 比色、ELISA 及细胞分化检测等方法。结果 Egb(17.5、35、70、105 mg/d)均出现细胞增殖抑制,亚细胞结构趋于正常,并且明显降低HepG2 细胞高水平分泌AFP 。EGb(35、70 mg/d)可抑制肝SMMC-7721 细胞的γ-GT 活性,升高白蛋白(ALB)含量。EGb(70、105 mg/d)亦可抑制肝癌Bel-7402细胞的γ-GT 活性,并升高ALB 含量。结论 EGb 具有抑制肝癌生长、AFP 分泌及γ-GT 活性的作用,诱导其在体外向正常肝细胞分化。
【关键词】银杏叶提物;肝癌细胞；甲胎蛋白；γ-谷氨酰转移酶活性
Effecttiontion of Hepatoma cell line growth stock、α-FP excretion and γ-glutamyl transferase activity by applying ginkgo biloba leaves extract
SUN Xiao,PEI Xu-dong.Henan Province Nanyang Urban Central Hospital,Nanyang 473009,China
【Abstract】 Objective To study effecttiontion of hepatoma cell line growth stock、α-FP excretion and γ-glutamyl transferase activity by applying ginkgo biloba leaves extract(EGb).Methods To discern Vitamin D anthropo-hepatoma carcinoma cellline growth stock SMMC-7721 cell and Bel-7402 cell，to co-culture 6 days unitingEGb(17.5~105 mg/d),to utilize(Mono-nuclear cell direc cytotoxicity assay)MTT shade selection,(enzyme-linked immunosorbentassay)ELISA and cellular differentiation detecting system.Results As all to show cytostasis,subcellular structure to normalin,and obviously step down HepG2 cell homo-level secrete α-FP,using EGb(17.5、35、70、105 mg/d).Egb(35、70 mg/d)hold-back SMMC-7721 hepat-cellularγ glutamyl transferase activity,to heighten albumin contents.Eg(70、105 mg/d)hold-back Bel-7402 hepat-cellularγ glutamyl transferase activity,to heighten albumin contents.Conclusion EGb have effection which to inhibit hepatoma cell line growth stock、α-FPexcretion and γ-glutamyl transferase activity；to guide to hepat-cellular differentiation in vitro.
【Key words】Ginkgo biloba leaves extract; Hepatoma carcinoma cell；α-foetoprotein(α-FP)；γ-glutamyl transferase activity
银杏为银杏科植物(Ginkogo biloba L),其叶和果有重要药用价值,银杏提取物主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物。国内外学者对银杏的化学成分、药理作用进行了广泛的研究,证实其对减轻肝细胞炎性反应/抗肝细胞纤维化有确切治疗作用。银杏叶抗肿瘤作用目前有少许报道,有学者用小鼠移植性肿瘤模型对肝癌实体型Heps进行了研究,认为银杏叶聚戊烯醇等对Heps有良好的抗癌作用[1]。本研究选择两种人肝癌细胞株(SMMC-7721,Bel-7402),观察EGb对体外培养肝癌细胞株生长、甲胎蛋白(AFP)分泌及γ-GT 活性的影响。
1 资料与方法
1.1 药品与试剂 EGb(金钠多注射液,5 ml/支,含银杏提取物17.5 mg,其中银杏黄酮甙4.2 mg，德国舒培大药厂提供,)。5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)注射液(25 g/L,杭州民生药厂产品)。DMEM 及Hams F12 培养基干粉(Sigma 公司),RPMI 1640 培养基干粉(Gibco 公司)。甲胎蛋白(AFP)酶联免疫测定试剂盒:北京北方生物技术研究所,γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)测定试剂盒:北京中生公司生产,白蛋白(ALB)测定溴甲酚绿(BCG)试剂盒:上海荣盛生物技术有限公司。
1.2 主要仪器 MCL-XL 2 型流式细胞仪(美国Coulter 公司产品),EL-301 型酶联免疫仪(美国Bio-Tek 公司产),751 分光光度计(上海分析仪器厂)。
1.3 细胞株 人肝癌SMMC-7721细胞株和人肝癌Bel-7402细胞株由中国科学院细胞生物研究所王兴旺教授惠赠。体外培养的人肝癌HepG2 细胞系美国建株,从中国科学院细胞所引进传代培养,呈蜂窝状生长,不表达HBsAg,具有表达wtp53 和很强分泌AFP 的生物学特征。Bel-7402 细胞是我国建株,HBsAg 阳性。参照文献[2]分别以完全DMEM+F12(1∶1)培养液和完全1640 培养液传代培养。
1.4 TEA 对肝癌细胞增殖的影响 体外培养的人肝癌SMMC-7721和Bel-7402 细胞(2×108个/L)分别接种于96 孔培养板中,每孔100 μl,37 ℃、5%CO2 培养24 h,吸上清分别加入100 μl 不同浓度的TEA(5~160 mg/L),并设阳性对照药5-氟尿嘧啶(5-FU,12.5 mg/L)组和溶媒对照组,继续培养6 d,其中第4天更换相应的培养液。吸取上清测AFP; 同时用MTT 比色法[3]检测各培养孔贴壁肝癌细胞的A570 nm 值,计算药物对肝癌细胞增殖的抑制率。
1.5 对HepG2 细胞分泌AFP 的影响 按试剂盒说明用ELISA 双抗体夹心法定量检测上述培养上清中AFP 含量。结果以ng/(2×104 cell)表示。, 百拇医药(孙 晓 裴旭东)
【关键词】银杏叶提物;肝癌细胞；甲胎蛋白；γ-谷氨酰转移酶活性
Effecttiontion of Hepatoma cell line growth stock、α-FP excretion and γ-glutamyl transferase activity by applying ginkgo biloba leaves extract
SUN Xiao,PEI Xu-dong.Henan Province Nanyang Urban Central Hospital,Nanyang 473009,China
【Abstract】 Objective To study effecttiontion of hepatoma cell line growth stock、α-FP excretion and γ-glutamyl transferase activity by applying ginkgo biloba leaves extract(EGb).Methods To discern Vitamin D anthropo-hepatoma carcinoma cellline growth stock SMMC-7721 cell and Bel-7402 cell，to co-culture 6 days unitingEGb(17.5~105 mg/d),to utilize(Mono-nuclear cell direc cytotoxicity assay)MTT shade selection,(enzyme-linked immunosorbentassay)ELISA and cellular differentiation detecting system.Results As all to show cytostasis,subcellular structure to normalin,and obviously step down HepG2 cell homo-level secrete α-FP,using EGb(17.5、35、70、105 mg/d).Egb(35、70 mg/d)hold-back SMMC-7721 hepat-cellularγ glutamyl transferase activity,to heighten albumin contents.Eg(70、105 mg/d)hold-back Bel-7402 hepat-cellularγ glutamyl transferase activity,to heighten albumin contents.Conclusion EGb have effection which to inhibit hepatoma cell line growth stock、α-FPexcretion and γ-glutamyl transferase activity；to guide to hepat-cellular differentiation in vitro.
【Key words】Ginkgo biloba leaves extract; Hepatoma carcinoma cell；α-foetoprotein(α-FP)；γ-glutamyl transferase activity
银杏为银杏科植物(Ginkogo biloba L),其叶和果有重要药用价值,银杏提取物主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物。国内外学者对银杏的化学成分、药理作用进行了广泛的研究,证实其对减轻肝细胞炎性反应/抗肝细胞纤维化有确切治疗作用。银杏叶抗肿瘤作用目前有少许报道,有学者用小鼠移植性肿瘤模型对肝癌实体型Heps进行了研究,认为银杏叶聚戊烯醇等对Heps有良好的抗癌作用[1]。本研究选择两种人肝癌细胞株(SMMC-7721,Bel-7402),观察EGb对体外培养肝癌细胞株生长、甲胎蛋白(AFP)分泌及γ-GT 活性的影响。
1 资料与方法
1.1 药品与试剂 EGb(金钠多注射液,5 ml/支,含银杏提取物17.5 mg,其中银杏黄酮甙4.2 mg，德国舒培大药厂提供,)。5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)注射液(25 g/L,杭州民生药厂产品)。DMEM 及Hams F12 培养基干粉(Sigma 公司),RPMI 1640 培养基干粉(Gibco 公司)。甲胎蛋白(AFP)酶联免疫测定试剂盒:北京北方生物技术研究所,γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)测定试剂盒:北京中生公司生产,白蛋白(ALB)测定溴甲酚绿(BCG)试剂盒:上海荣盛生物技术有限公司。
1.2 主要仪器 MCL-XL 2 型流式细胞仪(美国Coulter 公司产品),EL-301 型酶联免疫仪(美国Bio-Tek 公司产),751 分光光度计(上海分析仪器厂)。
1.3 细胞株 人肝癌SMMC-7721细胞株和人肝癌Bel-7402细胞株由中国科学院细胞生物研究所王兴旺教授惠赠。体外培养的人肝癌HepG2 细胞系美国建株,从中国科学院细胞所引进传代培养,呈蜂窝状生长,不表达HBsAg,具有表达wtp53 和很强分泌AFP 的生物学特征。Bel-7402 细胞是我国建株,HBsAg 阳性。参照文献[2]分别以完全DMEM+F12(1∶1)培养液和完全1640 培养液传代培养。
1.4 TEA 对肝癌细胞增殖的影响 体外培养的人肝癌SMMC-7721和Bel-7402 细胞(2×108个/L)分别接种于96 孔培养板中,每孔100 μl,37 ℃、5%CO2 培养24 h,吸上清分别加入100 μl 不同浓度的TEA(5~160 mg/L),并设阳性对照药5-氟尿嘧啶(5-FU,12.5 mg/L)组和溶媒对照组,继续培养6 d,其中第4天更换相应的培养液。吸取上清测AFP; 同时用MTT 比色法[3]检测各培养孔贴壁肝癌细胞的A570 nm 值,计算药物对肝癌细胞增殖的抑制率。
1.5 对HepG2 细胞分泌AFP 的影响 按试剂盒说明用ELISA 双抗体夹心法定量检测上述培养上清中AFP 含量。结果以ng/(2×104 cell)表示。, 百拇医药(孙 晓 裴旭东)