CD44v3基因蛋白在鼻咽癌中的表达以及与肿瘤转移的关系(1)
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【摘要】 目的研究粘附分子CD44变异型-3(CD44v3)在鼻咽癌中的表达和肿瘤浸润、转移的关系。 方法采用免疫组化两步法检测鼻咽癌组中CD44v3蛋白在鼻咽癌和正常组中的表达差异，以及和鼻咽癌临床特征的关系。 结果鼻咽癌组中CD44v3蛋白阳性表达率高于对照组( P [1]。CD44v3在鼻咽癌中的研究国内外尚未见报道。本研究采用免疫组化法探索该因子在鼻咽癌中的情况。
1 材料与方法
1.1 病例标本 本研究112例标本均来自广东医学院2006年1月至2007年1月门诊就诊患者，男62例，女50例，最小年龄18岁，最大年龄88岁。取正常鼻咽黏膜组织90例作为对照组。鼻咽癌的临床分期标准为1992年福州鼻咽癌会议达成的标准 [2]。
1.2 试剂 鼠抗人CD44v3单克隆抗体，DAB显色试剂盒PV-6002小鼠两步法试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
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1.3 方法 标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片5 μm厚。采用免疫组化两步法，按照试剂盒说明书的步骤进行操作，切片经过柠檬酸缓冲液(pH=6.0)高压热修复抗原处理。PBS 替代一抗作为阴性对照，已知CD44v3 阳性的乳腺鳞癌组织作为阳性对照。
1.4 结果判定 CD44v3阳性判定 细胞膜出现棕褐色颗粒为阳性。每张切片在400倍光镜下观察10个镜野，每个视野计数100个肿瘤细胞，共计1 000个细胞，且每张切片阳性细胞百分数>10%为阳性，≤10%为阴性.以文献[3]标准评定强度。
1.5 统计学方法 计数资料组间差异比较采用四格表 χ2检验、行乘列表Spearman 相关性分析。统计分析采用SAS8.0软件。
2 结果
2.1 CD44v3阳性率在鼻咽癌组中为85.71%(96/112)；正常人鼻咽黏膜组中阳性率为4.65%(4/90)。CD44v3在鼻咽癌组高于正常人鼻咽黏膜组( P
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3 讨论
CD44是一种细胞表面跨膜糖蛋白黏附分子，其基因位于11号染色体的短臂上，由20个外显子组成，其中10个是组成型外显子，10个v区变异性拼接外显子，全长大概50kb[4]。 由于V区外显子在m RNA 水平的选择性拼接，产生多种CD44变异体。主要包括CD44v3、CD44v5、CD44v6、CD44v9等[5]。黏附分子CD44v3，是细胞粘附分子CD44变异型中的一个，介导细胞和细胞外基质之间的相互作用，在肿瘤的发展、转移中有密不可分的作用。研究发现CD44v3与细胞外基质中透明质酸的酶解产物结合来参与肿瘤细胞的增殖、分化、粘附、迁移及肿瘤血管形成等重要过程，在肿瘤的发展和转移中起着重要作用[6]。其可能的机制有：①CD44是淋巴细胞归巢受体,能与细胞外基质的多种成分结合(如透明质酸等),发挥其生理功能。依照CD44的生理功能,可以推测CD44v介导肿瘤转移的机制为CD44v表达阳性的癌细胞模仿淋巴细胞执行了细胞-细胞和细胞-基质的相互作用,这些相互作用为肿瘤扩散所必须[7]。研究表明，在肉瘤和结肠癌患者中，CD44v8-10阳性患者较阴性患者预后差[8-9];②CD44v与细胞外基质中的配体结合,导致细胞形态和游动性发生改变,参与了肿瘤细胞的浸润过程;③通过与远隔血管和淋巴管内尚未查明的配体结合,使转移至那里的癌细胞更稳定地寄宿,集落生长,有效地形成转移瘤，这在黑色素瘤中得到证实[10]。辛榕等用免疫组化法发现，在骨肉瘤患者有淋巴结转移组中阳性表达高于无淋巴结转移组，提示CD44v3在肿瘤转移中有意义[11]。CD44v3在胆囊癌的阳性表达高于良性病变组；有淋巴转移原发癌组织中CD44v3表达高于无淋巴转移者；CD44v3在胆囊癌临床I~Ⅱ期的表达低于Ⅲ一Ⅳ期[12]。Pif-fko和Yokozaki等发现CD44(v6)的研究发现在口腔的不典型增生病变中是高表达，但是在口腔鳞状细胞癌中却低表达或无表达[13-14];因此推测CD44v3可能在身体不同部位的肿瘤中表达情况不尽相同，作用也不尽相同 。, 百拇医药(许卫华 付亚峰 崔德威 黄雪琴)