ENA检测对诊断系统性红斑狼疮的临床应用
【关键词】抗核抗体谱线性免疫分析法;狼疮细胞;系统性红斑狼疮
系统性红斑狼疮(SLE)诊断主要依靠临床表现，而在疾病早期临床表现较为明显，为达到早期诊断和治疗的目的。以达到提高疗效，控制及延缓病情发展、减轻患者痛苦，临床需要能早期诊断的实验室指标，而LE细胞的检查恰是在患者早期就诊、无药物影响的情况下进行的检测，阳性率极高。这对SLE的早期诊断提供了有利的实验室指标、争取到治疗的有利时间，同时联合可提取性核抗原(ENA)多种自身抗体的检测，能够更好地观察病情发展，结合临床表现为指导治疗起到有力的辅助作用。现对48例SLE患者及40例健康体检合格者血液采用ENA抗体检测及红斑狼疮(SLE)细胞玻片法检测，并对结果进行回顾性分析，将实验报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料来源 48例SLE患者均来至南京中国医学科学院皮肤病研究所和江西省皮肤病院门诊和住院患者。时间为2004年1月至2007年6月，其中男5例，女43例，年龄13～54岁，平均32.2岁，均符合82年在ARA(美国风湿学会)修订的SLE分类标准；对照组为我院健康体检合格者40例，其中男4例，女36例，年龄为18～51岁，平均35.1岁。
, http://www.100md.com
1.2 仪器、试剂和方法
1.2.1 标本的采集 所采的被检标本均为空腹不抗凝血2～3 ml，以2 500 r/min速度离心15 min分离血清，加样时无纤维、气泡或其他物质。
1.2.2 ENA检测 采用德国IMTEC公司生产的抗核抗体谱线性免疫分析试剂进行检测，检验方法采用线性免疫分析法(LIA)，并严格按我室SOP标准文件进行操作。①膜条与稀释的患者血清(1∶101)在20~25℃室温下共同孵育45 min，样本中的特异性抗体与膜条上的抗原结合。孵育完成后经过3次洗涤除去未结合的蛋白;②在膜条上加入辣根过氧化物酶标记抗人IgG二抗检测此结合抗体进行第二次孵育，45 min后洗涤3次除去未结合的蛋白;③加入无色的底物液，此结合抗体表现为兰色免疫复合物。除去底物后，用蒸馏水充分冲洗终止反应。膜条干燥后将实验结果与试剂盒提供的特异判读卡比较，可判断结果。
1.2.3 LE细胞检测(改良方法) ①试验前LE细胞底物片的制备：取健康人静脉血，注满玻片中央上的小橡皮圈(圈直径5 mm左右，圈长7~8 mm)，放入湿盒内盖上方盘盖，37℃放置1~1.5 h;②取出玻片，用镊子轻轻向上提取橡皮圈后弃之，等玻片上的血膜自然干燥后，用健康人血清(浆)洗涤至无血凝块，待自然干燥后在玻片背面按圈痕用标记笔画圈后，放入标本盒内置于4℃冰箱保存备用。操作:①是将已制备好的玻片(底物片)防入湿盒，并在玻片的血膜圈痕上防入同样大小的小橡皮圈;②取患者静脉血(或手指血)滴满橡皮圈内，置37℃下1~1.5 h;③取出玻片弃去橡皮圈，用健康人血清(血浆或混合的血清)洗涤圈痕内血凝块;④待玻片干燥后，瑞氏染色，置高倍镜或油镜下寻找LE细胞[1，2]。
, 百拇医药
1.3 统计方法 阳性数据均采用医学统计学进行处理。计量资料以表示。两样本组比较和样本组与对照组比较均采用χ2检验。
2 结果
2.1 ENA和LE细胞检测在48例SLE患者及40例对照组结果比较，经χ2检验，分别为χ2=72.92%(P2=60.42%(P
3 讨论
SLE是一种慢性多系统的疾病，常伴有多种血清自身抗体，被认为是一种典型的自身免疫性疾病。抗ENA抗体是针对ENA的一种自身抗体。本试验应用线性免疫分析法(LIA)，将核抗原印迹于硝化纤维膜上，封闭非特异反应区，能显著提高自身抗体的灵敏性和特异性，可同时检测多种自身抗体，对于SLE的诊断具有重要意义。抗ENA抗体包括范围很大，凡可提取抗原所检测的抗体均在其中。本检测中检测抗体：抗ds-DNA抗体、Nucleosomes核小体、抗Sm1抗体、P0抗体、Histones组蛋白、U1-snRNP抗体、SS-A/Ro60 kD、SS-A/Ro52 kD、La/SSB抗体、Scl-70抗体、CENP-B着丝点抗体、抗J0-1抗体。其中抗SmD1抗体在70.83%以上的SLE患者中可以见到，可见抗Sm D1抗体对SLE具有很高的特异性[3]；抗ds-DNA抗体在SLE患者中活动期阳性率可达到93.75%，与文献基础一致[4]，两者联合检测是SLE的重要诊断指标[5]。Nucleosomes核小体活动期SLE患者中可高达97.92%；Histones组蛋白在狼疮患者中56.25%可见；P0抗体在狼疮患者中仅16.67%可见，略低于文献报道[6]；SS-A/Ro60 kD、SS-A/Ro52 kD抗体大部分见于干燥综合证患者，在狼疮(SLE)患者血清中见到30%左右阳性，此为合并干燥综合证所致；La/SSB抗体主要见于干燥综合证，阳性率只有12.50%；抗Scl-70抗体主要出现于系统性硬皮病患者中，抗Jo-1多见于多肌炎/皮肌炎；U1-snRNP抗体多在混合性结缔组织病(MCTD)中可见,对SLE的诊断可信度为37.50%，与相关报道接近[7]。
, 百拇医药
自身抗体是SLE的一个重要诊断指标,本次试验应用的线性免疫分析法(LIA)和免疫印迹法类似，其不仅包容了免疫印迹法的一切优点还简化了操作步骤,同时在温度和避光显色上做了改进，实验表明SLE患者抗核小体抗体阳性率为97.92%,抗ds-DNA阳性率为93.75%,与文献报道基本一致[8，9]。加以辅助LE细胞检测(改良方法),其阳性率可达60.42%[2]，两者联合检测为早期诊断SLE及多种自身免疫性疾病提供了检验结果,能更好的为临床医师提供诊断依据，结合临床进一步检查、确诊。并有简便、可靠、重复性好,有较高的特异性和敏感性等优点,一般实验室均能开展,可作为检测ENA抗体的常规方法在临床广泛开展。
参考文献
1 叶任高.系统性红斑狼疮.内科学.北京人民卫生出版社，2001：909-915.
2 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.红斑狼疮细胞.南京东南大学出版社,1997：401-403.
, 百拇医药
3 张志斌,陶娟,朱锦英.抗Sm D1抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值.中华检验医学杂志，2005,28(3)：297-298.
4 陈曼单，陈林兴.抗核抗体谱在自身免疫性疾病的检测及应用.实用医技杂志，2005，12(2A)：302-304.
5 武永康,王兰兰,张瑞薇,等.两种抗体阳性对抗核抗体阴性的确证试验价值探讨.中华检验医学杂志,2003,26(4)：237.
6 吴振彪，朱平，王彦宏，等.系统性红斑狼疮患者血清抗核糖体P蛋白抗体的检测及其临床意义.细胞与分子免疫学杂志，2005，21(1)：120-122.
7 邹自英，李素华，陈 莉.13种自身抗体检测对SLE的诊断价值及临床意义.细胞与分子免疫学杂志，2007，23(5) ：443-446.
, 百拇医药
8 钟清，甘华，陈瀑，等.抗核小体抗体与系统性红斑狼疮的相关性研究.中华风湿病学杂志，2003，7(2)：111-113.
9 Min DJ,Kim SJ,Park SH,et al.Anti-nucleosome antibody:significance in lupus patients lacking anti-double-stranded DNA antibody.Clin Exp Rheumatol，2002,20(1) ：13-18.
10 朱明艳，周艳丽，王艳.SLE患者血中ANA、ds-DNA、ENA和ANuA联合检测的临床意义.吉林医学，2006，27(5)：497-498., 百拇医药(郭 春 谭立明 李洪文 秦玉凤 刘雯雯 周志军)
系统性红斑狼疮(SLE)诊断主要依靠临床表现，而在疾病早期临床表现较为明显，为达到早期诊断和治疗的目的。以达到提高疗效，控制及延缓病情发展、减轻患者痛苦，临床需要能早期诊断的实验室指标，而LE细胞的检查恰是在患者早期就诊、无药物影响的情况下进行的检测，阳性率极高。这对SLE的早期诊断提供了有利的实验室指标、争取到治疗的有利时间，同时联合可提取性核抗原(ENA)多种自身抗体的检测，能够更好地观察病情发展，结合临床表现为指导治疗起到有力的辅助作用。现对48例SLE患者及40例健康体检合格者血液采用ENA抗体检测及红斑狼疮(SLE)细胞玻片法检测，并对结果进行回顾性分析，将实验报告如下。
1 材料和方法
1.1 材料来源 48例SLE患者均来至南京中国医学科学院皮肤病研究所和江西省皮肤病院门诊和住院患者。时间为2004年1月至2007年6月，其中男5例，女43例，年龄13～54岁，平均32.2岁，均符合82年在ARA(美国风湿学会)修订的SLE分类标准；对照组为我院健康体检合格者40例，其中男4例，女36例，年龄为18～51岁，平均35.1岁。
, http://www.100md.com
1.2 仪器、试剂和方法
1.2.1 标本的采集 所采的被检标本均为空腹不抗凝血2～3 ml，以2 500 r/min速度离心15 min分离血清，加样时无纤维、气泡或其他物质。
1.2.2 ENA检测 采用德国IMTEC公司生产的抗核抗体谱线性免疫分析试剂进行检测，检验方法采用线性免疫分析法(LIA)，并严格按我室SOP标准文件进行操作。①膜条与稀释的患者血清(1∶101)在20~25℃室温下共同孵育45 min，样本中的特异性抗体与膜条上的抗原结合。孵育完成后经过3次洗涤除去未结合的蛋白;②在膜条上加入辣根过氧化物酶标记抗人IgG二抗检测此结合抗体进行第二次孵育，45 min后洗涤3次除去未结合的蛋白;③加入无色的底物液，此结合抗体表现为兰色免疫复合物。除去底物后，用蒸馏水充分冲洗终止反应。膜条干燥后将实验结果与试剂盒提供的特异判读卡比较，可判断结果。
1.2.3 LE细胞检测(改良方法) ①试验前LE细胞底物片的制备：取健康人静脉血，注满玻片中央上的小橡皮圈(圈直径5 mm左右，圈长7~8 mm)，放入湿盒内盖上方盘盖，37℃放置1~1.5 h;②取出玻片，用镊子轻轻向上提取橡皮圈后弃之，等玻片上的血膜自然干燥后，用健康人血清(浆)洗涤至无血凝块，待自然干燥后在玻片背面按圈痕用标记笔画圈后，放入标本盒内置于4℃冰箱保存备用。操作:①是将已制备好的玻片(底物片)防入湿盒，并在玻片的血膜圈痕上防入同样大小的小橡皮圈;②取患者静脉血(或手指血)滴满橡皮圈内，置37℃下1~1.5 h;③取出玻片弃去橡皮圈，用健康人血清(血浆或混合的血清)洗涤圈痕内血凝块;④待玻片干燥后，瑞氏染色，置高倍镜或油镜下寻找LE细胞[1，2]。
, 百拇医药
1.3 统计方法 阳性数据均采用医学统计学进行处理。计量资料以表示。两样本组比较和样本组与对照组比较均采用χ2检验。
2 结果
2.1 ENA和LE细胞检测在48例SLE患者及40例对照组结果比较，经χ2检验，分别为χ2=72.92%(P2=60.42%(P
3 讨论
SLE是一种慢性多系统的疾病，常伴有多种血清自身抗体，被认为是一种典型的自身免疫性疾病。抗ENA抗体是针对ENA的一种自身抗体。本试验应用线性免疫分析法(LIA)，将核抗原印迹于硝化纤维膜上，封闭非特异反应区，能显著提高自身抗体的灵敏性和特异性，可同时检测多种自身抗体，对于SLE的诊断具有重要意义。抗ENA抗体包括范围很大，凡可提取抗原所检测的抗体均在其中。本检测中检测抗体：抗ds-DNA抗体、Nucleosomes核小体、抗Sm1抗体、P0抗体、Histones组蛋白、U1-snRNP抗体、SS-A/Ro60 kD、SS-A/Ro52 kD、La/SSB抗体、Scl-70抗体、CENP-B着丝点抗体、抗J0-1抗体。其中抗SmD1抗体在70.83%以上的SLE患者中可以见到，可见抗Sm D1抗体对SLE具有很高的特异性[3]；抗ds-DNA抗体在SLE患者中活动期阳性率可达到93.75%，与文献基础一致[4]，两者联合检测是SLE的重要诊断指标[5]。Nucleosomes核小体活动期SLE患者中可高达97.92%；Histones组蛋白在狼疮患者中56.25%可见；P0抗体在狼疮患者中仅16.67%可见，略低于文献报道[6]；SS-A/Ro60 kD、SS-A/Ro52 kD抗体大部分见于干燥综合证患者，在狼疮(SLE)患者血清中见到30%左右阳性，此为合并干燥综合证所致；La/SSB抗体主要见于干燥综合证，阳性率只有12.50%；抗Scl-70抗体主要出现于系统性硬皮病患者中，抗Jo-1多见于多肌炎/皮肌炎；U1-snRNP抗体多在混合性结缔组织病(MCTD)中可见,对SLE的诊断可信度为37.50%，与相关报道接近[7]。
, 百拇医药
自身抗体是SLE的一个重要诊断指标,本次试验应用的线性免疫分析法(LIA)和免疫印迹法类似，其不仅包容了免疫印迹法的一切优点还简化了操作步骤,同时在温度和避光显色上做了改进，实验表明SLE患者抗核小体抗体阳性率为97.92%,抗ds-DNA阳性率为93.75%,与文献报道基本一致[8，9]。加以辅助LE细胞检测(改良方法),其阳性率可达60.42%[2]，两者联合检测为早期诊断SLE及多种自身免疫性疾病提供了检验结果,能更好的为临床医师提供诊断依据，结合临床进一步检查、确诊。并有简便、可靠、重复性好,有较高的特异性和敏感性等优点,一般实验室均能开展,可作为检测ENA抗体的常规方法在临床广泛开展。
参考文献
1 叶任高.系统性红斑狼疮.内科学.北京人民卫生出版社，2001：909-915.
2 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.红斑狼疮细胞.南京东南大学出版社,1997：401-403.
, 百拇医药
3 张志斌,陶娟,朱锦英.抗Sm D1抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值.中华检验医学杂志，2005,28(3)：297-298.
4 陈曼单，陈林兴.抗核抗体谱在自身免疫性疾病的检测及应用.实用医技杂志，2005，12(2A)：302-304.
5 武永康,王兰兰,张瑞薇,等.两种抗体阳性对抗核抗体阴性的确证试验价值探讨.中华检验医学杂志,2003,26(4)：237.
6 吴振彪，朱平，王彦宏，等.系统性红斑狼疮患者血清抗核糖体P蛋白抗体的检测及其临床意义.细胞与分子免疫学杂志，2005，21(1)：120-122.
7 邹自英，李素华，陈 莉.13种自身抗体检测对SLE的诊断价值及临床意义.细胞与分子免疫学杂志，2007，23(5) ：443-446.
, 百拇医药
8 钟清，甘华，陈瀑，等.抗核小体抗体与系统性红斑狼疮的相关性研究.中华风湿病学杂志，2003，7(2)：111-113.
9 Min DJ,Kim SJ,Park SH,et al.Anti-nucleosome antibody:significance in lupus patients lacking anti-double-stranded DNA antibody.Clin Exp Rheumatol，2002,20(1) ：13-18.
10 朱明艳，周艳丽，王艳.SLE患者血中ANA、ds-DNA、ENA和ANuA联合检测的临床意义.吉林医学，2006，27(5)：497-498., 百拇医药(郭 春 谭立明 李洪文 秦玉凤 刘雯雯 周志军)