1.2 方法

    1.2.1 COI序列分析

    1.2.1.1 地龙组织中模板DNA的提取

    取地龙药材组织、洗净、去除泥沙，挑选药材组织中肌肉组织较多者为优，采用DNA提取试剂盒上的规定方法进行操作。具体步骤如下：1)剪取地龙药材组织25 mg，以肌肉组织较多者为优，放于1.5 mL离心管中，加入180 μL的Buffer ATL，20 μL的蛋白酶K，涡旋均匀，56 ℃下孵育直到其完全裂解。2)加入200 μL的Buffer AL，涡旋混匀。3)加入200 μL的无水乙醇，涡旋混匀(沉淀DNA)。4)吸取混合液过吸附柱后放置于2 mL的收集管中，8 000 r/min转速，离心半径35 cm，离心时间为1 min，丢弃废液。5)将吸附柱放于2 mL的收集管中，加入500 μL Buffer AW1，8 000 r/min转速，离心半径35 cm，离心时间为1 min，丢弃废液。6)将吸附柱放置于2 mL的收集管中，加入500 μL Buffer AW2，14 000 r/min转速，离心半径10 cm ......