丹参酮合成相关的SmCYP81C16基因克隆和功能研究(3)
1.3 样品 两年生丹参(S.miltiorrhiza)99-3植物采自中国医学科学院药用植物研究所试验地,于盛花期采集丹参根、茎、叶、花等部位,清水洗净,置于液氮中速冻,并保存于-80 ℃冰箱中备用。2 方法与结果
2.1 RNA提取和cDNA合成 取丹参不同部位的样品,置于研钵中,液氮研磨至均匀粉末,依据天根生化科技(北京)有限公司的多糖多酚植物总RNA提取试剂盒的操作步骤提取丹参总RNA,利用NanoDrop2000进行含量测定以及1%的琼脂糖电泳检测RNA完整性。利用无RNA酶的脱氧核糖核酸酶(DNase I)对提取的RNA进行处理,去除RNA提取物中所含的DNA;再利用宝日医公司的PrimeScriptTM II 1st strand cDNA合成试剂盒,按照提供的反应条件和步骤将RNA反转录成第一链互补链DNA(cDNA)。
2.2 SmCYP81C16基因克隆及生物信息学分析 基于丹参基因组中的SmCYP81C16基因全长序列 ......
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