1.5 细胞活力检测(CCK-8)：①根据实验设计将不同浓度顺铂(0、5、10、20mg/ml)刺激A375黑素瘤细胞24h后，取出培养板;②倒掉培养基，向待检测孔中加20?l的CCK-8溶液;③将CCK-8溶液处理后的培养板，直接放入37℃孵箱继续培养2h;④采用多功能微孔板检测仪测定每孔490nm处的吸光度，得到每孔的OD值;⑤测得的每个孔中OD值，制作时间点-活细胞率曲线图。实验重复至少3次。

    采用CCK-8分别检测：顺铂(10mg/ml)处理A375黑素瘤細胞0h、24h、48h、72h的OD值;LY294002(PI3K通路抑制剂)预处理黑素瘤细胞A375中1h后联用顺铂(10mg/ml)处理0h、24h、48h、72h的OD值;Rap(mTOR通路抑制剂)预处理黑素瘤细胞A375中1h后联用顺铂(10mg/ml)处理0h、24h、48h、72h的OD值;根据测得的OD值制作时间点-活细胞率曲线图。

    1.6 统计学分析：所有结果均采用SPSS 23.0软件进行统计分析。

    2 结果

    2.1 顺铂诱导黑素瘤A375细胞凋亡具有浓度和时间依赖性：为研究黑素瘤A375细胞在不同浓度顺铂(0、5、10、20mg/ml)刺激24h下的凋亡情况 ......