miR—let—7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡(3)
2.4 miR-let-7d在對黑色素瘤细胞凋亡行为的影响：通过流式细胞术实验进一步检查miR-let-7b对A375细胞凋亡行为的影响，实验结果显示(见图7～8)，与NC组相比，miR-let-7b-inhibitor组细胞凋亡数目明显升高[(39.6±7.2)% vs(1.0±0.4)%，P<0.05]，G1期细胞周期进程明显停滞[(83.2±6.8)% vs(61.2±5.1)%，P<0.05]。表明抑制miR-let-7b的表达后可以促进黑色素瘤A375细胞的凋亡行为，加速其凋亡。
3 讨论
人皮肤黑色素瘤是黑色素恶性肿瘤中较常见的类型，相比其他部位的黑色素瘤类型发病率较高，且皮肤黑色素瘤患者的预后较差，主要原因是早期转移可能性大，晚期肿瘤治疗效果不佳，对多种化疗药物及放疗的反应不佳[9]。目前关于黑色素瘤的主要治疗方式有手术和放疗，手术针对局部黑色素瘤的治疗效果较好，而皮肤多部位的黑色素瘤的治疗主要依靠放疗[10]。所以研究黑色素瘤的分子生物学机制是改善目前临床治疗效果的有效途径，并可在一定程度上减少放疗的副作用。
, http://www.100md.com
miR-let-7b是在哺乳动物细胞内广泛存在的一种调控因子，miR-let-7b的异常表达与多种类型的肿瘤细胞的癌基因的表达相关，其在不同类型的肿瘤中扮演促癌或抑癌的作用，具有明显的组织特异性[11]。之前几项研究探讨了miRNA在黑色素瘤中的调节作用，使用定量实时PCR检查了157种miRNA在原发性黑色素瘤和良性痣中的相对表达水平[12]。 Appari等学者研究指出miR-let-7家族在原发性黑色素瘤组织中表达显着上调，并指出miR-let-7可能与相关蛋白靶点联合影响黑色素瘤细胞的转移行为[13]。而且miR-let-7b参与肿瘤细胞的细胞周期进程，可以调控细胞周期蛋白的表达，包括CCND1，E2F1，Cyclin A2和Cyclin D1等等。本研究专注于细胞周期调控蛋白CCND1和miR-let-7b之间的关系，并验证其为miR-let-7b的直接分子靶标。通过后续的克隆形成实验和流式细胞术检测CCND1和miR-let-7b对黑色素瘤细胞增殖凋亡行为的影响，明确miR-let-7b对黑色素瘤细胞增殖行为有一定的促进作用。以前的研究报道，子宫内膜样腺癌组织中miR-let-7b的表达明显低于邻近的正常子宫内膜[14]。而最近发现miR-let-7b的表达可以干扰实质性肿瘤中的进展过程，比如肝癌，胃癌及胰腺癌等，但是关于miR-let-7b在皮肤黑色素瘤中研究报道甚少，没有系统的阐释其具体的作用方式。本研究指出抑制miR-let-7b的表达可以在一定程度上降低黑素瘤细胞的增殖能力，并可通过下调细胞周期CCND1蛋白阻碍细胞周期的进展，促进细胞凋亡。尽管我们认为G1细胞周期阻滞是miR-let-7b表达下调后的结果，但不能排除其他途径参与调节的可能性。目前已发现在多种人类恶性肿瘤(包括甲状旁腺腺瘤，乳腺癌，结肠癌，淋巴瘤，肺癌，黑素瘤和前列腺癌)中CCND1的表达异常，尽管与良性痣相比，转移性皮肤黑色素瘤样本中CCND1蛋白水平较高，但是涉及的相关癌基因的转录或翻译过程也可能有CCND1的参与，表明CCND1的表达在黑色素瘤的发展过程中起到一定的调控作用。之前有研究指出可以通过丝裂原活化蛋白激酶途径诱导CCND1表达，并且通常在黑色素瘤中存在过度活化这现象[15]。结合本研究的结果一致表明，在黑素瘤细胞中，miR-let-7b可以抑制CCND1蛋白的表达，干扰细胞周期的进展，扮演促癌因子的作用。
, 百拇医药
综上所述，以上结果有助于解释黑素瘤中miR-let-7b和CCND1蛋白的异常表达的现象，并进一步阐释了两者在原发性皮肤黑色素瘤中必要作用，后续实验进一步了解miR-let-7b的下调是否是黑色素瘤迁移和侵袭行为的诱导因素。miR-let-7b在黑色素瘤细胞中具有有效的抗增殖作用，所以它可能成为黑色素瘤临床治疗的新型分子靶标。
[参考文献]
[1]Rastrelli M，Tropea S，Rossi CR，et al.Melanoma： Epidemiology， risk factors， pathogenesis， diagnosis and classification[J].In Vivo，2014，28(6)：1005-1011.
[2]Spencer KR，Mehnert JM.Mucosal melanoma： epidemiology， biology and treatment[M].Springer International Publishing，2016：295-320.
, 百拇医药
[3]Ali Z，Yousaf N，Larkin J.Melanoma epidemiology， biology and prognosis[J].EJC Suppl，2013，11(2)：81.
[4]Duschek N，Skvara H，Kittler H，et al.Melanoma epidemiology of Austria reveals gender-related differences[J].Eur J Dermatol，2013，23(6)：872-878.
[5]Nikolaou V，Stratigos AJ.Emerging trends in the epidemiology of melanoma[J].Br J Dermatol，2014，170(1)：11-19.
[6]Pfeffer SR，Grossmann KF，Cassidy PB，et al.Detection of exosomal miRNAs in the plasma of melanoma patients[J].J Clin Med，2015，4(12)：2012-2027., 百拇医药(秦琴 宁花兰 陈小燕)
3 讨论
人皮肤黑色素瘤是黑色素恶性肿瘤中较常见的类型，相比其他部位的黑色素瘤类型发病率较高，且皮肤黑色素瘤患者的预后较差，主要原因是早期转移可能性大，晚期肿瘤治疗效果不佳，对多种化疗药物及放疗的反应不佳[9]。目前关于黑色素瘤的主要治疗方式有手术和放疗，手术针对局部黑色素瘤的治疗效果较好，而皮肤多部位的黑色素瘤的治疗主要依靠放疗[10]。所以研究黑色素瘤的分子生物学机制是改善目前临床治疗效果的有效途径，并可在一定程度上减少放疗的副作用。
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miR-let-7b是在哺乳动物细胞内广泛存在的一种调控因子，miR-let-7b的异常表达与多种类型的肿瘤细胞的癌基因的表达相关，其在不同类型的肿瘤中扮演促癌或抑癌的作用，具有明显的组织特异性[11]。之前几项研究探讨了miRNA在黑色素瘤中的调节作用，使用定量实时PCR检查了157种miRNA在原发性黑色素瘤和良性痣中的相对表达水平[12]。 Appari等学者研究指出miR-let-7家族在原发性黑色素瘤组织中表达显着上调，并指出miR-let-7可能与相关蛋白靶点联合影响黑色素瘤细胞的转移行为[13]。而且miR-let-7b参与肿瘤细胞的细胞周期进程，可以调控细胞周期蛋白的表达，包括CCND1，E2F1，Cyclin A2和Cyclin D1等等。本研究专注于细胞周期调控蛋白CCND1和miR-let-7b之间的关系，并验证其为miR-let-7b的直接分子靶标。通过后续的克隆形成实验和流式细胞术检测CCND1和miR-let-7b对黑色素瘤细胞增殖凋亡行为的影响，明确miR-let-7b对黑色素瘤细胞增殖行为有一定的促进作用。以前的研究报道，子宫内膜样腺癌组织中miR-let-7b的表达明显低于邻近的正常子宫内膜[14]。而最近发现miR-let-7b的表达可以干扰实质性肿瘤中的进展过程，比如肝癌，胃癌及胰腺癌等，但是关于miR-let-7b在皮肤黑色素瘤中研究报道甚少，没有系统的阐释其具体的作用方式。本研究指出抑制miR-let-7b的表达可以在一定程度上降低黑素瘤细胞的增殖能力，并可通过下调细胞周期CCND1蛋白阻碍细胞周期的进展，促进细胞凋亡。尽管我们认为G1细胞周期阻滞是miR-let-7b表达下调后的结果，但不能排除其他途径参与调节的可能性。目前已发现在多种人类恶性肿瘤(包括甲状旁腺腺瘤，乳腺癌，结肠癌，淋巴瘤，肺癌，黑素瘤和前列腺癌)中CCND1的表达异常，尽管与良性痣相比，转移性皮肤黑色素瘤样本中CCND1蛋白水平较高，但是涉及的相关癌基因的转录或翻译过程也可能有CCND1的参与，表明CCND1的表达在黑色素瘤的发展过程中起到一定的调控作用。之前有研究指出可以通过丝裂原活化蛋白激酶途径诱导CCND1表达，并且通常在黑色素瘤中存在过度活化这现象[15]。结合本研究的结果一致表明，在黑素瘤细胞中，miR-let-7b可以抑制CCND1蛋白的表达，干扰细胞周期的进展，扮演促癌因子的作用。
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综上所述，以上结果有助于解释黑素瘤中miR-let-7b和CCND1蛋白的异常表达的现象，并进一步阐释了两者在原发性皮肤黑色素瘤中必要作用，后续实验进一步了解miR-let-7b的下调是否是黑色素瘤迁移和侵袭行为的诱导因素。miR-let-7b在黑色素瘤细胞中具有有效的抗增殖作用，所以它可能成为黑色素瘤临床治疗的新型分子靶标。
[参考文献]
[1]Rastrelli M，Tropea S，Rossi CR，et al.Melanoma： Epidemiology， risk factors， pathogenesis， diagnosis and classification[J].In Vivo，2014，28(6)：1005-1011.
[2]Spencer KR，Mehnert JM.Mucosal melanoma： epidemiology， biology and treatment[M].Springer International Publishing，2016：295-320.
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[3]Ali Z，Yousaf N，Larkin J.Melanoma epidemiology， biology and prognosis[J].EJC Suppl，2013，11(2)：81.
[4]Duschek N，Skvara H，Kittler H，et al.Melanoma epidemiology of Austria reveals gender-related differences[J].Eur J Dermatol，2013，23(6)：872-878.
[5]Nikolaou V，Stratigos AJ.Emerging trends in the epidemiology of melanoma[J].Br J Dermatol，2014，170(1)：11-19.
[6]Pfeffer SR，Grossmann KF，Cassidy PB，et al.Detection of exosomal miRNAs in the plasma of melanoma patients[J].J Clin Med，2015，4(12)：2012-2027., 百拇医药(秦琴 宁花兰 陈小燕)