苦豆子遗传转化体系建立及SaLDC启动子缺失分析(1)
[摘要] 药用植物遗传转化体系的建立对其功能基因研究具有重要意义，该研究在已有苦豆子再生体系的基础上，对农杆菌菌液浓度、农杆菌侵染时间、农杆菌与苦豆子愈伤组织的共培养时间、愈伤组织预培养时间、乙酰丁香酮添加方式和乙酰丁香酮浓度6个遗传转化因子进行优化，结果表明在预培养15 d的苦豆子愈伤组织中农杆菌菌液浓度A600为0.9、侵染时间15 min、农杆菌与愈伤组织共培养48 h、并在侵染液中添加AS 200 μmol·L-1时，GUS瞬时转化效率高达83.33%。以苦豆子基因组DNA为模板克隆获得SaLDC上游1 260 bp的启动子序列(GenBank登录号KY038928)，将不同长度(310，594，765，924，1 260 bp)的启动子缺失片段分别与GUS报告基因融合，构建的植物表达载体经农杆菌介导转化苦豆子愈伤组织，GUS瞬时表达结果显示，5个不同长度的SaLDC启动子片段均可驱动GUS在苦豆子愈伤组织中的表达 ......
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