知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤增殖生长的机制研究(1)
[摘要]考察知母皂苷AⅢ抑制人脑胶质瘤U87MG细胞增殖的作用及机制分析。在裸鼠皮下荷瘤模型中，知母皂苷AⅢ组与模型组相比，显著降低瘤重。知母皂苷AⅢ呈剂量依赖性抑制U87MG细胞的体外增殖；呈剂量依赖性降低βCatenin，Cyclin D1，Bcl2的蛋白表达，同时升高p21在蛋白和基因水平的表达；降低ERK磷酸化水平，抑制βCatenin的核转移，同时提高p38和JNK蛋白的磷酸化水平。联用JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580后可逆转知母皂苷AⅢ处理而提高的p21和降低的βCatenin的蛋白表达。知母皂苷AⅢ部分通过干预MAPK及Wnt/βCatenin信号通路而抑制脑胶质瘤U87MG的增殖。
[关键词]知母皂苷AⅢ；人脑胶质瘤U87MG；细胞增殖；MAPK信号通路；Wnt/βCatenin信号通路
[Abstract]To explore the inhibitory effect of timosaponin AⅢ on the proliferation of human glioblastoma cell line U87MG and investigate its related mechanism As compared with the model group， the tumor weight was significantly reduced in timosaponin AⅢtreated group Timosaponin AⅢinhibited the proliferation of U87MG cell line in a dosedependent manner It upregulated the gene and protein expression levels of p21， meanwhile inhibited the protein expression levels of βCatenin， Cyclin D1 and Bcl2 It also inhibited the translocation of βCatenin into nucleus， suppressed the phosphorylation expression of ERK， but increased the phosphorylation expression of p38 and JNK Combined use of JNK inhibitor SP600125 and p38 inhibitor SB203580 could decrease p21 and increase βCatenin protein expressions Timosaponin AⅢ inhibited the proliferation of human glioblastoma cell line U87MG partly by intervening MAPK and Wnt/βCatenin signal pathways
, 百拇医药
[Key words]timosaponin AⅢ； human glioblastoma cell U87MG； cell proliferation； MAPK signal pathway； Wnt/βCatenin signal pathway
中藥知母是百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge的干燥根茎，具有滋阴润燥、清热泻火等功效。其性寒，味苦，归肺、胃、肾经，临床用于外感热病、骨蒸潮热、肺热燥咳、高热烦渴等症状[1]。其主要药理活性成分知母皂苷在知母根茎中的质量分数约为6% [2]。国内外研究人员发现知母皂苷AⅢ能抑制ADP诱导的血小板聚集、诱导肿瘤细胞自噬等[34]，近年来对于知母皂苷AⅢ抗肿瘤活性的研究日益深入[57]，有希望将其开发成一种新的抗癌类药物。
脑胶质瘤(脑胶质细胞瘤)约占颅内肿瘤的70%。恶性脑胶质瘤是34岁以下肿瘤患者的第二位死亡原因，患者平均存活的中位时间是14个月。脑胶质瘤多呈侵袭性生长，总体疗效不佳，是神经外科治疗中最棘手的难治性肿瘤之一[810]。目前尚未有知母皂苷AⅢ抑制脑胶质瘤增殖生长的相关报道。该文考察知母皂苷AⅢ体内外抑制脑胶质瘤增殖生长的作用并基于MAPK信号通路和Wnt/βCatenin信号通路考察其机制。
, 百拇医药
1材料
11药物与试剂知母皂苷AⅢ、淫羊藿苷Ⅱ、红景天苷、原薯蓣皂苷元均购自上海同田生物技术股份有限公司；人脑恶性胶质瘤细胞株U87MG购自美国ATCC公司；DMEM干粉培养基、胎牛血清购自Gibco公司；二甲基亚砜、噻唑蓝购自西格玛奥德里奇(SigmaAldrich)公司；cDNA逆转录试剂盒、Trizol试剂购自赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)公司；RealMasterMix(SYBR Green)试剂盒、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂PhosSTOP均购自美国Roche公司；引物均由生工生物工程(上海)有限公司合成。Marker预染蛋白购自Progema公司；NC膜购自英国沃特曼Whatman公司；一抗βactin，pERK，TERK，pp38，Tp38，pJNK，TJNK，βCatenin购自美国细胞生物技术(Cell Signaling Technology)公司；p21、Cyclin D1抗体、二抗山羊抗鼠、二抗山羊抗兔均购自美国abCAM公司。ECL化学发光试剂盒购自美国通用公司生命技术科学部门(GE)；BCA蛋白浓度测定试剂盒、RIPA蛋白强裂解液、Bcl2抗体、HDAC1抗体、细胞核蛋白细胞浆蛋白抽提试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯。
, 百拇医药
12仪器生物安全柜(Delta series，Labconco，美国)；CO2培养箱(HEPA CLASS100，Thermo，美国)；细胞计数仪(XDS500C，上海蔡康光学仪器有限公司)；倒置显微镜(IX 71，Olympus，日本)；QB9006 恒温微孔板快速振荡器(海门市其林贝尔仪器有限公司)；荧光定量PCR仪(7500 Fast System，Applied Biosystems公司，美国)；超声波细胞粉碎机(JY922D，宁波新芝生物股份有限公司)；低温高速离心机(Eppendorf Centrifuge 5810R，德国)；电泳仪(PowerPacTMHC，BIORAD公司，美国)；脱色摇床(TS8，Kylinbell Lab Instruments，中国)；凝胶成像系统(Tanon NIM2045，上海天能公司)；Spectra MAX190酶标仪(MD公司，美国)。, 百拇医药(谭希 潘会君 吴伟达 章丹丹)
[关键词]知母皂苷AⅢ；人脑胶质瘤U87MG；细胞增殖；MAPK信号通路；Wnt/βCatenin信号通路
[Abstract]To explore the inhibitory effect of timosaponin AⅢ on the proliferation of human glioblastoma cell line U87MG and investigate its related mechanism As compared with the model group， the tumor weight was significantly reduced in timosaponin AⅢtreated group Timosaponin AⅢinhibited the proliferation of U87MG cell line in a dosedependent manner It upregulated the gene and protein expression levels of p21， meanwhile inhibited the protein expression levels of βCatenin， Cyclin D1 and Bcl2 It also inhibited the translocation of βCatenin into nucleus， suppressed the phosphorylation expression of ERK， but increased the phosphorylation expression of p38 and JNK Combined use of JNK inhibitor SP600125 and p38 inhibitor SB203580 could decrease p21 and increase βCatenin protein expressions Timosaponin AⅢ inhibited the proliferation of human glioblastoma cell line U87MG partly by intervening MAPK and Wnt/βCatenin signal pathways
, 百拇医药
[Key words]timosaponin AⅢ； human glioblastoma cell U87MG； cell proliferation； MAPK signal pathway； Wnt/βCatenin signal pathway
中藥知母是百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge的干燥根茎，具有滋阴润燥、清热泻火等功效。其性寒，味苦，归肺、胃、肾经，临床用于外感热病、骨蒸潮热、肺热燥咳、高热烦渴等症状[1]。其主要药理活性成分知母皂苷在知母根茎中的质量分数约为6% [2]。国内外研究人员发现知母皂苷AⅢ能抑制ADP诱导的血小板聚集、诱导肿瘤细胞自噬等[34]，近年来对于知母皂苷AⅢ抗肿瘤活性的研究日益深入[57]，有希望将其开发成一种新的抗癌类药物。
脑胶质瘤(脑胶质细胞瘤)约占颅内肿瘤的70%。恶性脑胶质瘤是34岁以下肿瘤患者的第二位死亡原因，患者平均存活的中位时间是14个月。脑胶质瘤多呈侵袭性生长，总体疗效不佳，是神经外科治疗中最棘手的难治性肿瘤之一[810]。目前尚未有知母皂苷AⅢ抑制脑胶质瘤增殖生长的相关报道。该文考察知母皂苷AⅢ体内外抑制脑胶质瘤增殖生长的作用并基于MAPK信号通路和Wnt/βCatenin信号通路考察其机制。
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11药物与试剂知母皂苷AⅢ、淫羊藿苷Ⅱ、红景天苷、原薯蓣皂苷元均购自上海同田生物技术股份有限公司；人脑恶性胶质瘤细胞株U87MG购自美国ATCC公司；DMEM干粉培养基、胎牛血清购自Gibco公司；二甲基亚砜、噻唑蓝购自西格玛奥德里奇(SigmaAldrich)公司；cDNA逆转录试剂盒、Trizol试剂购自赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific)公司；RealMasterMix(SYBR Green)试剂盒、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂PhosSTOP均购自美国Roche公司；引物均由生工生物工程(上海)有限公司合成。Marker预染蛋白购自Progema公司；NC膜购自英国沃特曼Whatman公司；一抗βactin，pERK，TERK，pp38，Tp38，pJNK，TJNK，βCatenin购自美国细胞生物技术(Cell Signaling Technology)公司；p21、Cyclin D1抗体、二抗山羊抗鼠、二抗山羊抗兔均购自美国abCAM公司。ECL化学发光试剂盒购自美国通用公司生命技术科学部门(GE)；BCA蛋白浓度测定试剂盒、RIPA蛋白强裂解液、Bcl2抗体、HDAC1抗体、细胞核蛋白细胞浆蛋白抽提试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯。
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12仪器生物安全柜(Delta series，Labconco，美国)；CO2培养箱(HEPA CLASS100，Thermo，美国)；细胞计数仪(XDS500C，上海蔡康光学仪器有限公司)；倒置显微镜(IX 71，Olympus，日本)；QB9006 恒温微孔板快速振荡器(海门市其林贝尔仪器有限公司)；荧光定量PCR仪(7500 Fast System，Applied Biosystems公司，美国)；超声波细胞粉碎机(JY922D，宁波新芝生物股份有限公司)；低温高速离心机(Eppendorf Centrifuge 5810R，德国)；电泳仪(PowerPacTMHC，BIORAD公司，美国)；脱色摇床(TS8，Kylinbell Lab Instruments，中国)；凝胶成像系统(Tanon NIM2045，上海天能公司)；Spectra MAX190酶标仪(MD公司，美国)。, 百拇医药(谭希 潘会君 吴伟达 章丹丹)