药效学结合正交试验优选参连颗粒剂的醇提工艺(1)
[摘要] 对参连方中醇提部分工艺进行优选。在以致豚鼠心律失常时哇巴因的消耗量为药效指标，考察全方水提，全方水提醇沉，党参等水提醇沉，丹参等醇提和党参等水提、丹参等醇提4种不同提取工艺路线的基础上，采用L9(34)正交表进行正交实验，以不同实验方案的出膏率及丹酚酸B、丹参酮ⅡA、小檗碱3种指标成分的含量为评价指标，研究乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素对醇提部分提取工艺的影响，应用综合评分法优选最佳提取工艺，并进行工艺验证试验。所得最佳提取工艺为加入60%乙醇共提取2次，分别加入10，9倍量、提取2.0 h，丹酚酸B、丹参酮ⅡA、小檗碱提取量分别为42.01，0.41，40.15 mg·g-1。优选的工艺稳定、可行，可为参连颗粒的工业化生产提供依据。
[关键词] 参连方； 醇提； 正交试验； 多指标加权综合评分法
[Abstract] To optimize the ethanol extraction process for Shenlian formula. On the basis of the pharmacodynamics index for different extraction process routes， the contents of salvianolic acid B， tanshinone ⅡA and berberine， as well as the extraction ratio in different experimental schemes were used as the ethanol extraction examining indexes， and multi-criterion synthesizing grading method was used for data analysis to optimize and verify the ethanol-extraction process conditions in orthogonal experiment. The optimum ethanol extraction process was as follows： adding 60% ethanol， 10 times amount， extracting for 2.0 h each time for a total of 2 times. This extraction process showed good stability and availability.
, 百拇医药
[Key words] Shenlian formulaion； ethanol-extraction； orthogonal test； multi-index comprehensive weighted score evaluation
参连方为北京中医药大学东方医院经验方，由丹参、黄连、川芎等11味药组成，具有益气活血、清热化痰、安神复脉的功效，用于治疗冠心病室性期前收缩属气虚血瘀、痰热扰心证，症见心悸心烦、怕热喜凉、气短、舌暗苔腻。该方临床效果显著：2010—2013年使用该方治疗的总有效率为82.2%，前期研究表明，其具有明显抗乌头碱、氯化钙和异丙肾所致大鼠心律失常作用[1-2]。
因该方临床治疗效果显著，本课题组拟按照《药品注册管理办法》的要求，对参连处方进行新药开发。药效学试验对处方工艺路线进行了初选，对方中醇提部分丹参、黄连、川芎、远志等药味的提取工艺进行研究，选择丹酚酸B、丹参酮ⅡA、小檗碱为考察指标，进行正交试验，采用多指标加权评分法优选最佳提取工艺。为参连颗粒的研发提供实验支持。
, 百拇医药
1 材料
LC-20AD岛津高效液相色谱仪(SPD-M20A，PDA检测器，LC Solution色谱工作站)；Purospher RP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；赛多利斯BT 25S电子分析天平(北京赛多利斯公司，1/10万)；KQ5200型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；DZKW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；SHB-Ⅲ型水循环多用真空泵(上海振捷实验设备有限公司)；FE20型实验室pH计(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；ZNHW型智能控温电热套(北京中仪泓瑞科技发展有限公司)；DZF-6051真空干燥箱(利康达圣科技发展有限公司)。
丹酚酸B对照品(批号111562-201313，纯度97.0%)，丹参酮ⅡA(批号110766-200619，纯度98.0%)，盐酸小檗碱对照品(批号110713-201212；86.7%)均购自中国食品药品检定研究院。
, http://www.100md.com
处方中丹参、黄连、川芎等饮片均购自北京本草方源药业有限公司，经北京中医药大学刘春生教授鉴定均符合2015年版《中国药典》饮片标准，含量测定结果均合格。
乙腈(Fisher公司，色谱级)；磷酸(TED公司，色谱纯)；娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；哇巴因(Sigma-Aldrich公司)磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠等固体试剂为分析级；其他试剂为色谱级；95%药用乙醇(北京高华伟业食品添加剂有限公司)。
普通級豚鼠60只，体重240～320 g，北京芳元缘养殖场，许可证号SCXK(京)2009-0014。
2 方法
2.1 丹酚酸B、丹参酮ⅡA、小檗碱含量测定的色谱条件[3]
丹酚酸B：乙腈-0.1%磷酸(22∶78)，检测波长286 nm，柱温30 ℃，进样体积为10 μL，流速1.2 mL·min-1，色谱图见图1。
丹参酮ⅡA：流动相A为乙腈，B为0.02%磷酸，梯度洗脱(0～6 min，39%B；6～20 min，39%～10%B；20～20.5 min，10%～39%B；20.5～25 min，39%B)，流速1.0 mL·min-1，检测波长270 nm，柱温25 ℃，进样体积20 μL。隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量测定方法同丹参酮ⅡA：以丹参酮ⅡA对照品为参照，以其相应峰为S，计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的相对保留时间，相对保留时间应在该规定值的±5%。以丹参酮ⅡA的峰面积为对照，分别乘以校正因子，计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量。隐丹参酮：相对保留时间为0.75S，校正因子1.18；丹参酮Ⅰ：相对保留时间为0.79S，校正因子1.31，色谱图见图2。, http://www.100md.com(王敏 杜守颖 陈笑南 田志浩 陆洋 白洁 武慧超 张勤帅 万洁)
[关键词] 参连方； 醇提； 正交试验； 多指标加权综合评分法
[Abstract] To optimize the ethanol extraction process for Shenlian formula. On the basis of the pharmacodynamics index for different extraction process routes， the contents of salvianolic acid B， tanshinone ⅡA and berberine， as well as the extraction ratio in different experimental schemes were used as the ethanol extraction examining indexes， and multi-criterion synthesizing grading method was used for data analysis to optimize and verify the ethanol-extraction process conditions in orthogonal experiment. The optimum ethanol extraction process was as follows： adding 60% ethanol， 10 times amount， extracting for 2.0 h each time for a total of 2 times. This extraction process showed good stability and availability.
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[Key words] Shenlian formulaion； ethanol-extraction； orthogonal test； multi-index comprehensive weighted score evaluation
参连方为北京中医药大学东方医院经验方，由丹参、黄连、川芎等11味药组成，具有益气活血、清热化痰、安神复脉的功效，用于治疗冠心病室性期前收缩属气虚血瘀、痰热扰心证，症见心悸心烦、怕热喜凉、气短、舌暗苔腻。该方临床效果显著：2010—2013年使用该方治疗的总有效率为82.2%，前期研究表明，其具有明显抗乌头碱、氯化钙和异丙肾所致大鼠心律失常作用[1-2]。
因该方临床治疗效果显著，本课题组拟按照《药品注册管理办法》的要求，对参连处方进行新药开发。药效学试验对处方工艺路线进行了初选，对方中醇提部分丹参、黄连、川芎、远志等药味的提取工艺进行研究，选择丹酚酸B、丹参酮ⅡA、小檗碱为考察指标，进行正交试验，采用多指标加权评分法优选最佳提取工艺。为参连颗粒的研发提供实验支持。
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1 材料
LC-20AD岛津高效液相色谱仪(SPD-M20A，PDA检测器，LC Solution色谱工作站)；Purospher RP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；赛多利斯BT 25S电子分析天平(北京赛多利斯公司，1/10万)；KQ5200型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；DZKW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；SHB-Ⅲ型水循环多用真空泵(上海振捷实验设备有限公司)；FE20型实验室pH计(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；ZNHW型智能控温电热套(北京中仪泓瑞科技发展有限公司)；DZF-6051真空干燥箱(利康达圣科技发展有限公司)。
丹酚酸B对照品(批号111562-201313，纯度97.0%)，丹参酮ⅡA(批号110766-200619，纯度98.0%)，盐酸小檗碱对照品(批号110713-201212；86.7%)均购自中国食品药品检定研究院。
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处方中丹参、黄连、川芎等饮片均购自北京本草方源药业有限公司，经北京中医药大学刘春生教授鉴定均符合2015年版《中国药典》饮片标准，含量测定结果均合格。
乙腈(Fisher公司，色谱级)；磷酸(TED公司，色谱纯)；娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；哇巴因(Sigma-Aldrich公司)磷酸二氢钾、十二烷基硫酸钠等固体试剂为分析级；其他试剂为色谱级；95%药用乙醇(北京高华伟业食品添加剂有限公司)。
普通級豚鼠60只，体重240～320 g，北京芳元缘养殖场，许可证号SCXK(京)2009-0014。
2 方法
2.1 丹酚酸B、丹参酮ⅡA、小檗碱含量测定的色谱条件[3]
丹酚酸B：乙腈-0.1%磷酸(22∶78)，检测波长286 nm，柱温30 ℃，进样体积为10 μL，流速1.2 mL·min-1，色谱图见图1。
丹参酮ⅡA：流动相A为乙腈，B为0.02%磷酸，梯度洗脱(0～6 min，39%B；6～20 min，39%～10%B；20～20.5 min，10%～39%B；20.5～25 min，39%B)，流速1.0 mL·min-1，检测波长270 nm，柱温25 ℃，进样体积20 μL。隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量测定方法同丹参酮ⅡA：以丹参酮ⅡA对照品为参照，以其相应峰为S，计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的相对保留时间，相对保留时间应在该规定值的±5%。以丹参酮ⅡA的峰面积为对照，分别乘以校正因子，计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ含量。隐丹参酮：相对保留时间为0.75S，校正因子1.18；丹参酮Ⅰ：相对保留时间为0.79S，校正因子1.31，色谱图见图2。, http://www.100md.com(王敏 杜守颖 陈笑南 田志浩 陆洋 白洁 武慧超 张勤帅 万洁)