广藿香内生真菌类群分析及其抗菌活性研究(1)
[摘要] 从广藿香的根、茎、叶中共分离得到72株内生真菌，根据ITS序列分析鉴定为25属40个种，其中拟茎点霉属Phomopsis、刺盘孢属Colletotrichum、镰刀菌属Fusarium为优势种群；广藿香内生真菌的分布存在明显的组织特异性，以茎中内生真菌的分布最多，占分离菌株总数的78%；活性测试结果显示共有15个属34株内生真菌至少对1种供试菌具有抗菌活性。结果表明广藿香内生真菌多样性丰富，部分菌株具有明显的抑菌活性，值得进一步深入研究。
[关键词] 内生真菌； 多样性； 广藿香； 抗菌活性
[Abstract] Seventy-two strains of endophytic fungi were isolated from roots， stems and leaves of Pogostemon cablin and identified as 40 species of 25 genera based on ITS sequences analysis. Among them， Phomopsis， Colletotrichum and Fusarium were dominant genera. Distribution of endophytic fungi in P. cablin showed obvious tissue-specificity， and more strains were isolated from stems with an isolation rate of 78%. The bioassay results indicated that 34 strains of 15 genera displayed antimicrobial activities against at least one of test bacteria or plant pathogenic fungi. The results obtained in this study showed that endophytic fungi in P. cablin were rich in species diversity， and some strains exhibited strong antimicrobial activities， which deserve further research.
, http://www.100md.com
[Key words] endophytic fungi； diversity； Pogostemon cablin； antimicrobial activity
植物内生真菌是指生长在植物体的根、茎、叶及果实等组织和器官内的一类真菌，是植物微生态系统中的重要组成成分，在进化过程中与宿主植物形成了互惠共生的关系[1]。内生真菌不但能产生结构丰富多样的次生代谢产物，已从中分离出多种生物活性物质，包括抗菌、抗肿瘤、抗氧化等天然化合物[2-3]，而且对植物的生长发育、活性成分的积累及植物抗逆性具有重要影响[4]。药用植物中同样存在着大量的内生真菌[5]，中药成分的形成、种植、抗病性及道地性可能都与内生菌有密切的关系[6]，因此，研究药用植物内生真菌资源的多样性不仅可以丰富真菌资源宝库，而且对于中药资源的保护和可持续利用具有重要的意义。
广藿香Pogostemon cablin (Blanco) Benth.为唇形科Lamiaceae刺蕊草属Pogostemon Desf.植物，是十大广药之一，其入药最早记载于唐代《新修本草》和《千金翼方》中，自宋、金、元以来已广泛应用于临床。它具有芳香化浊、和中止呕以及发表解暑的功能，用于胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛的治疗[7]。现代药理学研究表明，广藿香具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、杀虫等作用[8-11]。目前，对广藿香内生真菌的研究鲜有报道，为了探讨广藿香内生真菌的多样性、群落组成及其分布特征，本研究对其内生真菌进行了系统的分离和鉴定，并对分离得到的菌株发酵粗提物进行抗菌活性研究，旨在筛选出具有良好抗菌活性的菌株，为广藿香内生真菌的资源保护和开发利用提供基础资料和科学依据。
, 百拇医药
1 材料
1.1 仪器与试剂 RE-2000型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；超净工作台，上海恒益科技有限公司；YXQ-WY21-600电热高压蒸汽灭菌锅，广州市华南医疗器械有限公司；THZ-C-1摇床，广州市正一科技有限公司；Mastercycler gradient5331 PCR仪，Eppendof公司；EPS 3501电泳仪，Amersham Pharmacia Biotech公司。氨苄青霉素、硫酸卡那霉素、二甲基亚砜(DMSO)，均购自Sigma公司；Taq酶、DNA提取试剂盒，均购自大连宝生物工程有限公司；乙酸乙酯，广州化学试剂厂。
1.2 植物与内生真菌 广藿香植物于2012年10月采自广东阳春市马水镇，由广东药科大学中药学院严寒静副教授鉴定为P. cablin。内生真菌分离自健康的广藿香根、茎、叶。植物标本和分离菌株保存于广东省微生物研究所。
1.3 供试指示菌 细菌：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)、大肠杆菌(Escherichia coli，EC)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis，BS)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)。植物病原真菌：胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides，CG)、荔枝霜疫霉(Peronophthora litchic，PL)、鏈格孢(Alternaria alternata，AA)、柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium，CS)、新月弯孢霉(Curvularia lunata，CL)。所有菌株均保存于广东省微生物研究所。, http://www.100md.com(王营 李浩华 谭国慧 李赛妮 严明理 章卫民)
[关键词] 内生真菌； 多样性； 广藿香； 抗菌活性
[Abstract] Seventy-two strains of endophytic fungi were isolated from roots， stems and leaves of Pogostemon cablin and identified as 40 species of 25 genera based on ITS sequences analysis. Among them， Phomopsis， Colletotrichum and Fusarium were dominant genera. Distribution of endophytic fungi in P. cablin showed obvious tissue-specificity， and more strains were isolated from stems with an isolation rate of 78%. The bioassay results indicated that 34 strains of 15 genera displayed antimicrobial activities against at least one of test bacteria or plant pathogenic fungi. The results obtained in this study showed that endophytic fungi in P. cablin were rich in species diversity， and some strains exhibited strong antimicrobial activities， which deserve further research.
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[Key words] endophytic fungi； diversity； Pogostemon cablin； antimicrobial activity
植物内生真菌是指生长在植物体的根、茎、叶及果实等组织和器官内的一类真菌，是植物微生态系统中的重要组成成分，在进化过程中与宿主植物形成了互惠共生的关系[1]。内生真菌不但能产生结构丰富多样的次生代谢产物，已从中分离出多种生物活性物质，包括抗菌、抗肿瘤、抗氧化等天然化合物[2-3]，而且对植物的生长发育、活性成分的积累及植物抗逆性具有重要影响[4]。药用植物中同样存在着大量的内生真菌[5]，中药成分的形成、种植、抗病性及道地性可能都与内生菌有密切的关系[6]，因此，研究药用植物内生真菌资源的多样性不仅可以丰富真菌资源宝库，而且对于中药资源的保护和可持续利用具有重要的意义。
广藿香Pogostemon cablin (Blanco) Benth.为唇形科Lamiaceae刺蕊草属Pogostemon Desf.植物，是十大广药之一，其入药最早记载于唐代《新修本草》和《千金翼方》中，自宋、金、元以来已广泛应用于临床。它具有芳香化浊、和中止呕以及发表解暑的功能，用于胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊头痛的治疗[7]。现代药理学研究表明，广藿香具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、杀虫等作用[8-11]。目前，对广藿香内生真菌的研究鲜有报道，为了探讨广藿香内生真菌的多样性、群落组成及其分布特征，本研究对其内生真菌进行了系统的分离和鉴定，并对分离得到的菌株发酵粗提物进行抗菌活性研究，旨在筛选出具有良好抗菌活性的菌株，为广藿香内生真菌的资源保护和开发利用提供基础资料和科学依据。
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1 材料
1.1 仪器与试剂 RE-2000型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；超净工作台，上海恒益科技有限公司；YXQ-WY21-600电热高压蒸汽灭菌锅，广州市华南医疗器械有限公司；THZ-C-1摇床，广州市正一科技有限公司；Mastercycler gradient5331 PCR仪，Eppendof公司；EPS 3501电泳仪，Amersham Pharmacia Biotech公司。氨苄青霉素、硫酸卡那霉素、二甲基亚砜(DMSO)，均购自Sigma公司；Taq酶、DNA提取试剂盒，均购自大连宝生物工程有限公司；乙酸乙酯，广州化学试剂厂。
1.2 植物与内生真菌 广藿香植物于2012年10月采自广东阳春市马水镇，由广东药科大学中药学院严寒静副教授鉴定为P. cablin。内生真菌分离自健康的广藿香根、茎、叶。植物标本和分离菌株保存于广东省微生物研究所。
1.3 供试指示菌 细菌：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)、大肠杆菌(Escherichia coli，EC)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis，BS)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)。植物病原真菌：胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides，CG)、荔枝霜疫霉(Peronophthora litchic，PL)、鏈格孢(Alternaria alternata，AA)、柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium，CS)、新月弯孢霉(Curvularia lunata，CL)。所有菌株均保存于广东省微生物研究所。, http://www.100md.com(王营 李浩华 谭国慧 李赛妮 严明理 章卫民)