京大戟毒性部位及其醋制前后成分变化研究(2)
2.3RTPCR法测定小鼠结肠组织水通道蛋白表达水平提取冻存组织30 mg，用Trizol 按说明书要求提取组织RNA，并逆转录为cDNA。以βactin为内参照，根据 Genbank中 AQP1(NM_007472.2)，AQP3(NM_016689)基因片段序列设计如下引物并由上海生工生物工程股份有限公司合成，用PCR法扩增AQP1，AQP3。AQP1上游引物为CTGCAGGCGATTGACTACACT，下游引物为CCTTCATGCGGTCTGTGAAG；AQP3上游引物为CCATGCGCTAGCTACTTTGC，下游引物为GCCACAGCCAAACATCACAAG；βactin上游引物GACCCAGATCATGTT TGAGAC，下游引物为GTAGCCACGCTCGGTCAG；反应条件一致：20 μL的反应体系，94 ℃预变性30 s，94 ℃变性5 s，60 ℃退火34 s ......
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