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编号:12731140
3表达的影响> 松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及ZHX3表达的影响(2)
http://www.100md.com 2015年10月15日 《中国中药杂志》2015年第20期
     贴壁细胞生长融合达到80%以上时,弃去培养基,用不含血清的LDMEM冲洗细胞3次,加1mL0.25%胰酶(含0.04%EDTA)进行消化,倒置显微镜下观察细胞质收缩后,迅速加3mL完全培养基终止消化。巴氏吸管反复吹打细胞,镜下观察细胞呈单细胞悬浮状,以1000r·min-1离心3min,去掉上清,重新加入完全培养基。按1∶2进行传代培养,标记为P1。常规培养,每日在倒置显微镜下观察,当贴壁细胞达80%融合时,重复传代,依次标记为P2~P5。

    2.3BMSCs的鉴定取P3代BMSCs,调整细胞浓度为3×104个/mL,接种在置有盖玻片的24孔培养板内,每孔500μL,置于37℃5%CO2培养箱中培养,每天更换培养基,培养4d。第5天弃去培养基,4%多聚甲醛固定30min,PBS冲洗3次,每次1min;0.25%TritonX100处理10min ......
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