巴西莓对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用及对炎性细胞因子的影响(1)
[摘要] 目的：研究巴西莓对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用及机制。方法：Wistar大鼠适应性喂养1周后随机分为空白组、模型组、东宝肝泰组、巴西莓高、中、低剂量组(1.6，0.8，0.4 g·kg-1)，除空白组给蒸馏水外，其余各组均用56%白酒(二锅头)灌胃，用量为第1周8 mL·kg-1，以后每周增加0.1 mL(直至增加为15 mL·kg-1)，连续灌胃8周，建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型，观察巴西莓冻干粉对大鼠慢性酒精性肝损伤肝细胞膜通透性，肝脏脂质过氧化反应、细胞炎性因子变化、肝细胞病理改变等影响。结果：巴西莓可以降低血清ALT，AST(P<0.05)，升高肝脏GSH，SOD(P<0.05)水平，降低肝脏MDA，TG含量(P<0.05)，降低血清TNF-α，IL-6(P<0.05)含量。病理切片观察表明模型组肝脏以脂肪变性为主，部分肝脏可见肝细胞点状坏死，炎性细胞浸润，阳性药及巴西莓各剂量对大鼠肝脏病理改变有不同程度的作用。结论：巴西莓对酒精性肝损伤具有一定的保护作用，其机制可能与抑制TNF-α，IL-6等炎性因子有关。
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[关键词] 巴西莓;酒精肝损伤;抗氧化;抗炎
[收稿日期] 2014-03-13
[通信作者] 王林元，副教授，Tel：(010)64287912，E-mail：13381002202@vip.163.com
巴西莓又名阿萨伊(Acai)，是南美洲地区常用草药[1-2]，来源于棕榈科植物阿萨伊棕榈树Euterpe oleraceae Mart.的新鲜果实，近年来在世界范围内引起广泛关注，现代研究表明其具有降低氧化应激、抗炎、调节免疫力、降低血脂及血糖等多种生物活性。目前国际市场上出现了“巴西莓热”，2013年卫生部批准巴西莓(阿萨伊)进入我国作为新资源食品[3]使用，预计不久的将来巴西莓的相关产品也会在我国市场上成为热销产品。国外有用巴西莓为原料的产品减轻饮酒后的不适症状，为深入探讨巴西莓的生物活性和作用机制，本研究以大鼠慢性肝损伤为模型，探讨其保肝作用及对细胞因子的影响。
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1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠，雄性，体重220～240 g，由斯贝福(北京)实验动物科学技术有限公司提供，许可证号SCXK(京)2011-0004。
1.2 药物 巴西莓冻干粉由蒙维(上海)贸易有限公司提供(批号20101102)，用蒸馏水调成糊状置于胶体磨研末，稀释成0.16，0.08，0.04 g·mL-1的溶液。东宝肝泰片(复方蛋氨酸胆碱片)，通化东宝药业股份有限公司生产(批号130710)，用蒸馏水配成0.036 g·mL-1的溶液，相当于临床成人用量的6倍。
1.3 试剂 56度红星二锅头(北京红星股份有限公司，批号01-2F-75);GPT试剂盒(批号20140106)、GOT试剂盒(批号20131227)、SOD试剂盒(批号20140107)、MDA试剂盒(批号20140106)、GSH试剂盒(批号20140107)均购自南京建成生物工程研究所;甘油三酯试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司(批号20130113);肿瘤坏死因子-α测试盒(北京华英生物技术研究所，批号20140110);白细胞介素6测试盒(北京华英生物技术研究所，批号20131230)。
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1.4 仪器 JMS胶体磨(廊坊市冠通机械有限公司);TGL-16A台式高速冷冻离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司);752-C紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);WD-2102A型自动酶标仪(北京六一仪器厂);A-6半自动生化仪(松上技术有限公司);SK-l快速混匀器(江苏国华仪器厂);R-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司)。
2 方法
2.1 分组与处理 Wistar大鼠适应性喂养1周后随机分为空白组、模型组、东宝肝泰组(0.36 g·kg-1)、巴西莓高、中、低剂量组(1.6，0.8，0.4 g·kg-1)，除空白组给蒸馏水外，其余各组均用56%的二锅头白酒灌胃，用量为第1周8 mL·kg-1，以后每周增加0.1 mL(直至增加为15 mL·kg-1)，连续灌胃8周。大鼠造模的同时给药治疗，正常组和模型组给予蒸馏水灌胃，每天1次，每次用药体积均按10 mL·kg-1计算。末次给酒后禁食12 h，麻醉状态下取血，分离血清;取血后迅速剖取肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5 cm处取0.5 cm×0.5 cm大小肝组织，用4%的多聚甲醛固定。另取适量肝组织用冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后称取湿重0.3 g左右，加入预冷的生理盐水，冰水中制成10%匀浆，4 ℃ 3 500 r·min-1离心10 min，提取上清液。
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2.2 指标检测 取大鼠血清，按试剂盒方法测定ALT，AST，放射免疫法分析法测定血清TNF-α，IL-6的含量，取10%肝脏匀浆液，按试剂盒方法测定肝脏SOD，GSH，MDA，TG。
2.3 肝组织病理形态学观察 取用4%的多聚甲醛固定肝组织，常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜观察，参考文献中的方法对脂肪变性进行病理分级[4]。
2.4 统计方法 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行处理，结果以±s表示，对多组间均值检查方差齐性后采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，等级资料采用秩和检验，对多组间比较对秩进行变换后采用Ridit分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。, http://www.100md.com(屈胜胜 张建军 李艳霞 郑媛 朱映黎 王林元)
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[关键词] 巴西莓;酒精肝损伤;抗氧化;抗炎
[收稿日期] 2014-03-13
[通信作者] 王林元，副教授，Tel：(010)64287912，E-mail：13381002202@vip.163.com
巴西莓又名阿萨伊(Acai)，是南美洲地区常用草药[1-2]，来源于棕榈科植物阿萨伊棕榈树Euterpe oleraceae Mart.的新鲜果实，近年来在世界范围内引起广泛关注，现代研究表明其具有降低氧化应激、抗炎、调节免疫力、降低血脂及血糖等多种生物活性。目前国际市场上出现了“巴西莓热”，2013年卫生部批准巴西莓(阿萨伊)进入我国作为新资源食品[3]使用，预计不久的将来巴西莓的相关产品也会在我国市场上成为热销产品。国外有用巴西莓为原料的产品减轻饮酒后的不适症状，为深入探讨巴西莓的生物活性和作用机制，本研究以大鼠慢性肝损伤为模型，探讨其保肝作用及对细胞因子的影响。
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1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠，雄性，体重220～240 g，由斯贝福(北京)实验动物科学技术有限公司提供，许可证号SCXK(京)2011-0004。
1.2 药物 巴西莓冻干粉由蒙维(上海)贸易有限公司提供(批号20101102)，用蒸馏水调成糊状置于胶体磨研末，稀释成0.16，0.08，0.04 g·mL-1的溶液。东宝肝泰片(复方蛋氨酸胆碱片)，通化东宝药业股份有限公司生产(批号130710)，用蒸馏水配成0.036 g·mL-1的溶液，相当于临床成人用量的6倍。
1.3 试剂 56度红星二锅头(北京红星股份有限公司，批号01-2F-75);GPT试剂盒(批号20140106)、GOT试剂盒(批号20131227)、SOD试剂盒(批号20140107)、MDA试剂盒(批号20140106)、GSH试剂盒(批号20140107)均购自南京建成生物工程研究所;甘油三酯试剂盒(北京北化康泰临床试剂有限公司(批号20130113);肿瘤坏死因子-α测试盒(北京华英生物技术研究所，批号20140110);白细胞介素6测试盒(北京华英生物技术研究所，批号20131230)。
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1.4 仪器 JMS胶体磨(廊坊市冠通机械有限公司);TGL-16A台式高速冷冻离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司);752-C紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂);WD-2102A型自动酶标仪(北京六一仪器厂);A-6半自动生化仪(松上技术有限公司);SK-l快速混匀器(江苏国华仪器厂);R-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司)。
2 方法
2.1 分组与处理 Wistar大鼠适应性喂养1周后随机分为空白组、模型组、东宝肝泰组(0.36 g·kg-1)、巴西莓高、中、低剂量组(1.6，0.8，0.4 g·kg-1)，除空白组给蒸馏水外，其余各组均用56%的二锅头白酒灌胃，用量为第1周8 mL·kg-1，以后每周增加0.1 mL(直至增加为15 mL·kg-1)，连续灌胃8周。大鼠造模的同时给药治疗，正常组和模型组给予蒸馏水灌胃，每天1次，每次用药体积均按10 mL·kg-1计算。末次给酒后禁食12 h，麻醉状态下取血，分离血清;取血后迅速剖取肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5 cm处取0.5 cm×0.5 cm大小肝组织，用4%的多聚甲醛固定。另取适量肝组织用冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后称取湿重0.3 g左右，加入预冷的生理盐水，冰水中制成10%匀浆，4 ℃ 3 500 r·min-1离心10 min，提取上清液。
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2.2 指标检测 取大鼠血清，按试剂盒方法测定ALT，AST，放射免疫法分析法测定血清TNF-α，IL-6的含量，取10%肝脏匀浆液，按试剂盒方法测定肝脏SOD，GSH，MDA，TG。
2.3 肝组织病理形态学观察 取用4%的多聚甲醛固定肝组织，常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜观察，参考文献中的方法对脂肪变性进行病理分级[4]。
2.4 统计方法 采用SPSS 17.0统计软件对数据进行处理，结果以±s表示，对多组间均值检查方差齐性后采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，等级资料采用秩和检验，对多组间比较对秩进行变换后采用Ridit分析，以P<0.05为差异具有统计学意义。, http://www.100md.com(屈胜胜 张建军 李艳霞 郑媛 朱映黎 王林元)