铁皮石斛多糖和醇溶性浸出物动态累积规律研究(1)
[摘要] 为了揭示铁皮石斛多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律，为铁皮石斛科学采收提供依据。采用苯酚-浓硫酸法和醇溶性浸出物热浸法测定铁皮石斛3个优良品系一至三年生萌条的多糖和浸出物含量。结果表明，不同采收期铁皮石斛多糖、浸出物含量及其总量均存在极显著差异，与铁皮石斛的物候密切相关，其中多糖含量变化与开花密切相关，醇溶性浸出物含量与新芽形成、萌动密切相关。根据多糖与醇溶性浸出物含量的动态变化，以多糖为采收目标时在二年生开花前采收，以醇溶性浸出物为采收目标时以新芽萌动前采收最佳，以多糖与醇溶性浸出物总量为目标时以春芽萌动至开花前采收为宜。
[关键词] 铁皮石斛;品系;多糖;浸出物
[收稿日期] 2014-07-19
[基金项目] 浙江省产业技术创新战略联盟项目(2012LM201)
[通信作者] 斯金平，教授，主要从事药用植物品种选育，Tel：13868004019，E-mail：lssjp@163.com
, http://www.100md.com
铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是我国传统名贵中药材，具有益胃生津、滋阴清热等独特的功效[1]，多糖和醇溶性浸出物是铁皮石斛的主要成分，与药理作用有着密切的联系，是目前判断铁皮石斛质量的主要依据，2010年版《中国药典》在“含量测定”项中规定干品铁皮石斛多糖量不得低于25.0%，醇溶性浸出物量不得低于6.5%[2]。因此，研究铁皮石斛不同品系、不同采收时期多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律，对铁皮石斛品种选育与科学采收具有重要的意义。
1 材料
1.1 仪器与试剂 紫外-可见分光光度计(Thermo Scientific GENE-SYS 10s UV-VIS);KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);DK-S24型电热恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司);D-37520型高速离心机(德国Heraeus公司);AB104-N电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);DHG-9070HA精密型强制对流干燥箱(杭州蓝天化验仪器厂)。葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号110833-200904);重蒸酚(北京索莱宝科技有限公司);其他所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
, 百拇医药
1.2 供试样品 供试药材产于浙江省义乌市佛堂镇高效生态农业示范园区丹溪药博园，东经120°04′、北纬 29°18′，海拔高度为100 m。栽培地为连栋塑料温室大棚，主体采用热镀锌钢架结构，屋顶形式双弧拱型，骨架热镀锌低碳钢材，温室跨8 m，肩高3 m，顶高5 m，并用PEP膜和70%遮阳网覆盖，配套小雨型自动喷水系统。棚内设1.8 m宽畦，并用砖头切成槽，槽深20 cm，槽内填充70%松树皮+30%河卵石的混合基质[3]。
供试样品包括6A×2B，78×69，9×66 3个铁皮石斛品系，2011年4月种植，经形态特征、农艺性状等综合评价[4]，2013年4月至2014年3月，间隔30 d左右分别采集供试一年生、二年生和三年生萌条(萌条生理年龄)，每个品系每批采样重复3次，每小区采样不少于25个萌条，每丛植株只采集1个萌条，共108个样品。采集的样品茎叶分离，茎80 ℃烘至恒重，粉碎，过60目筛，干燥器储存待用。供试样品采集信息见表1。
2 方法
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2.1 多糖含量测定方法 参照2010年版《中国药典》(一部)，精密称定样品0.3 g，加水200 mL，水浴回流2 h，过滤，定容至250 mL，摇匀，精密量取溶液5 mL于50 mL离心管中，加无水乙醇25 mL，摇匀，冷藏1 h，4 000 r·min-1离心20 min，弃上清液，沉淀加80%乙醇20 mL 离心(同上)，重复2次，倒掉上清液，沉淀加热水溶解定容至50 mL。精密量取1 mL样品溶液，置于冰水中加5%苯酚溶液1 mL，混匀，精密加入5 mL浓硫酸，混匀，冰水中静置5 min，沸水浴20 min，取出冰水中放凉，以1 mL水为空白，于488 nm处测定吸光度，试验平行3次。以葡萄糖对照品制作标准曲线，其回归方程为Y=7.317 1X-0.002 5，R2=0.999 8，其中Y为吸光度，X为浓度。
2.2 醇溶性浸出物含量测定方法 参照2010年版《中国药典》(一部)附录VA项下热浸法测定，以95%无水乙醇作溶剂。精密称定供试样品样品2 g，置100 mL具塞圆底烧瓶中，精密加乙醇50 mL，密塞，称重，静置1 h， 85 ℃水浴回流，保持微沸1 h，放冷后取下，密塞，用95%乙醇补足差重，摇匀，过滤，精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称重，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量。重复3次。
, 百拇医药
2.3 数据统计与分析 利用Excel 2003对所测数据进行整理，SPSS 17.0软件进行单因素方差分析、非参数秩和检验和Duncan新复极差测验的多重比较分析。
3 结果与分析
3.1 多糖积累规律 供试的3个优良品系多糖含量测定结果和Duncan新复极差测验的多重比较结果见图1。铁皮石斛多糖含量与开花密切相关，一年生、二年生铁皮石斛在开花前多糖含量均随着生长期增长而增加，为开花结果积累了大量的多糖，开花初期(G 4月27日)达到高峰，开花后迅速下降，开花消耗了大量的多糖[6];三年生萌条，开花前多糖也有一定的积累，但随着叶片的脱落、萌条生理机能的下降，积累能力明显下降。
不同品系多糖动态变化不一致，与其对温度、光照、湿度等环境因子的响应程度不一致有关，如6A×2B品系多糖含量除二年生4月底采收时与78×69品系差异不显著外，多数月份明显低于78×69品系。因此，以多糖为主要收获指标时，6A×2B品系对收获期的要求更为严格。, 百拇医药(俞巧仙 郭英英 斯金平 吴令上 王林华)
[关键词] 铁皮石斛;品系;多糖;浸出物
[收稿日期] 2014-07-19
[基金项目] 浙江省产业技术创新战略联盟项目(2012LM201)
[通信作者] 斯金平，教授，主要从事药用植物品种选育，Tel：13868004019，E-mail：lssjp@163.com
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铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo是我国传统名贵中药材，具有益胃生津、滋阴清热等独特的功效[1]，多糖和醇溶性浸出物是铁皮石斛的主要成分，与药理作用有着密切的联系，是目前判断铁皮石斛质量的主要依据，2010年版《中国药典》在“含量测定”项中规定干品铁皮石斛多糖量不得低于25.0%，醇溶性浸出物量不得低于6.5%[2]。因此，研究铁皮石斛不同品系、不同采收时期多糖和醇溶性浸出物含量的动态变化规律，对铁皮石斛品种选育与科学采收具有重要的意义。
1 材料
1.1 仪器与试剂 紫外-可见分光光度计(Thermo Scientific GENE-SYS 10s UV-VIS);KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);DK-S24型电热恒温水浴锅(上海森信实验仪器有限公司);D-37520型高速离心机(德国Heraeus公司);AB104-N电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);DHG-9070HA精密型强制对流干燥箱(杭州蓝天化验仪器厂)。葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号110833-200904);重蒸酚(北京索莱宝科技有限公司);其他所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
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1.2 供试样品 供试药材产于浙江省义乌市佛堂镇高效生态农业示范园区丹溪药博园，东经120°04′、北纬 29°18′，海拔高度为100 m。栽培地为连栋塑料温室大棚，主体采用热镀锌钢架结构，屋顶形式双弧拱型，骨架热镀锌低碳钢材，温室跨8 m，肩高3 m，顶高5 m，并用PEP膜和70%遮阳网覆盖，配套小雨型自动喷水系统。棚内设1.8 m宽畦，并用砖头切成槽，槽深20 cm，槽内填充70%松树皮+30%河卵石的混合基质[3]。
供试样品包括6A×2B，78×69，9×66 3个铁皮石斛品系，2011年4月种植，经形态特征、农艺性状等综合评价[4]，2013年4月至2014年3月，间隔30 d左右分别采集供试一年生、二年生和三年生萌条(萌条生理年龄)，每个品系每批采样重复3次，每小区采样不少于25个萌条，每丛植株只采集1个萌条，共108个样品。采集的样品茎叶分离，茎80 ℃烘至恒重，粉碎，过60目筛，干燥器储存待用。供试样品采集信息见表1。
2 方法
, http://www.100md.com
2.1 多糖含量测定方法 参照2010年版《中国药典》(一部)，精密称定样品0.3 g，加水200 mL，水浴回流2 h，过滤，定容至250 mL，摇匀，精密量取溶液5 mL于50 mL离心管中，加无水乙醇25 mL，摇匀，冷藏1 h，4 000 r·min-1离心20 min，弃上清液，沉淀加80%乙醇20 mL 离心(同上)，重复2次，倒掉上清液，沉淀加热水溶解定容至50 mL。精密量取1 mL样品溶液，置于冰水中加5%苯酚溶液1 mL，混匀，精密加入5 mL浓硫酸，混匀，冰水中静置5 min，沸水浴20 min，取出冰水中放凉，以1 mL水为空白，于488 nm处测定吸光度，试验平行3次。以葡萄糖对照品制作标准曲线，其回归方程为Y=7.317 1X-0.002 5，R2=0.999 8，其中Y为吸光度，X为浓度。
2.2 醇溶性浸出物含量测定方法 参照2010年版《中国药典》(一部)附录VA项下热浸法测定，以95%无水乙醇作溶剂。精密称定供试样品样品2 g，置100 mL具塞圆底烧瓶中，精密加乙醇50 mL，密塞，称重，静置1 h， 85 ℃水浴回流，保持微沸1 h，放冷后取下，密塞，用95%乙醇补足差重，摇匀，过滤，精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称重，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量。重复3次。
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2.3 数据统计与分析 利用Excel 2003对所测数据进行整理，SPSS 17.0软件进行单因素方差分析、非参数秩和检验和Duncan新复极差测验的多重比较分析。
3 结果与分析
3.1 多糖积累规律 供试的3个优良品系多糖含量测定结果和Duncan新复极差测验的多重比较结果见图1。铁皮石斛多糖含量与开花密切相关，一年生、二年生铁皮石斛在开花前多糖含量均随着生长期增长而增加，为开花结果积累了大量的多糖，开花初期(G 4月27日)达到高峰，开花后迅速下降，开花消耗了大量的多糖[6];三年生萌条，开花前多糖也有一定的积累，但随着叶片的脱落、萌条生理机能的下降，积累能力明显下降。
不同品系多糖动态变化不一致，与其对温度、光照、湿度等环境因子的响应程度不一致有关，如6A×2B品系多糖含量除二年生4月底采收时与78×69品系差异不显著外，多数月份明显低于78×69品系。因此，以多糖为主要收获指标时，6A×2B品系对收获期的要求更为严格。, 百拇医药(俞巧仙 郭英英 斯金平 吴令上 王林华)