阿萨伊油中β—谷甾醇及总甾醇含量测定和抗氧化活性研究(1)
[摘要] 建立阿萨伊油中甾醇类成分的含量测定方法，并对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价。采用高效液相色谱法建立了阿萨伊油中β-谷甾醇、总甾醇(β-谷甾醇、豆甾醇之和，以β-谷甾醇计)的含量测定方法。采用Purosper STAR LP C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-异丙醇(30∶70)为流动相，流速1 mL·min-1，柱温为室温，蒸发光散射检测器漂移管温度70 ℃，雾化器流速2.0 L·min-1。结果表明β-谷甾醇在0.766～6.38 μg线性关系良好，回归方程为Y=1.639X+0.702 7(r=0.999 2)，平均加样回收率为95.7%(RSD 2.8%)。阿萨伊油中β-谷甾醇的质量分数为1.85 mg·g-1，总甾醇的质量分数为1.93 mg·g-1。同时采用总氧自由基清除能力(TOSC)法对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价，结果表明样品具有显著的抗氧化能力，样品浓度和抗氧化能力具有较好的剂量-效应关系。
[关键词] 阿萨伊; 高效液相色谱法; β-谷甾醇; 抗氧化剂; 总氧自由基清除能力
, http://www.100md.com
[收稿日期] 2014-09-30
[通信作者] *王林元，硕士，副教授，Tel：(010)64287912，E-mail：wangly@bucm.edu.cn
[作者简介] 贺成，硕士，助理实验师，E-mail：chenghe0121@gmail.com
Euterpe oleracea Mart 是南美洲亚马逊河及其支流流域特有的一种大型棕榈树，它的果实被称作阿萨伊，又称巴西莓(acai)，是一种南美洲传统草药，其果肉、果皮、种子以及果油皆可药用[1]。目前，阿萨伊因较强的抗氧化能力和可作为功能性食品而备受关注。有文献报道，阿萨伊作为一种天然抗氧化剂的新资源，深紫色的成熟果实富含花青素，但研究数据表明花青素对阿萨伊总体抗氧化能力的贡献大约只有10%，显然阿萨伊中存在具有抗氧化能力的未被识别的成分[2-3];对阿萨伊其他类成分的抗氧化活性研究未见报道。本研究进一步对阿萨伊中含量较多的油类成分进行分析，并研究其抗氧化活性。采用阿萨伊果实冻干粉制备阿萨伊油，选择其中具有抗氧化、抗癌、抗炎和降脂活性[4-5]的植物甾醇类成分进行分析并对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价。
, 百拇医药
评价成分体外抗氧化能力的方法很多[6-7]，但大都不能反映机体总体抗氧化能力。总氧自由基清除能力(total oxyradical scavenging capacity，TOSC)法是以顶空气相色谱法(headspace gas chromatography，HS-GC)为手段的以评价组分中任何可与氧自由基结合物质的抗氧化能力的指标，本文采用了TOSC法对阿萨伊油整体抗氧化活性进行了研究。
1 材料
Agilent 1100高效液相色谱仪(二极管阵列检测器，Alltech 2000蒸发光散射检测器)，Agilent 6890N气相色谱仪(7694E Headspace Sampler顶空进样器，氢火焰离子化检测器)，顶空进样瓶(安捷伦公司，10 mL);SHZ-88台式水浴恒温振荡器(江苏太仓实验设备厂)。
甲醇(色谱纯，Fisher Scientific);乙腈(色谱纯，Fisher Scientific);异丙醇(色谱纯，Fisher Scientific);4-甲硫基-2-氧丁酸钠(KMBA，Sigma);2，2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(ABAP，Sigma);还原型谷胱甘肽(GSH，Sigma);乙烯标准气体(纯度>99.9%，北京氧利来公司);磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，氢氧化钠，无水乙醇，三氯甲烷，浓硫酸(分析纯，国药试剂公司);β-谷甾醇(纯度>98%)，豆甾醇(纯度>95%)购自上海诗丹德生物技术有限公司。
, 百拇医药
阿萨伊冻干粉产于巴西帕拉州的阿萨伊，果实经过挑选、清洗、软化后，加水旋转搅拌磨碎，去除果核，过0.5 mm筛网后制成果浆，包装，冷冻储存。阿萨伊果浆再经冷冻干燥，制成冻干粉。阿萨伊果浆购自生产商巴西百利公司(Bela lacá Polpas de Frutas Indústria e Comércio Ltda)。阿萨伊冻干粉由美国蒙纳维公司(MonaVie Inc)提供。
阿萨伊油(Petroleum ether extract，PEE)的制备：称取阿萨伊冻干粉，加石油醚索氏提取，旋转蒸发回收溶剂至无石油醚味。得深绿色油状液体，冷藏。平行制备3批，平均收率为45.5%。
2 方法与结果
2.1 β-谷甾醇、总甾醇的含量测定
2.1.1 色谱条件和系统适用性试验 Purosper STAR LP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相乙腈(A)-异丙醇(B)梯度洗脱，0～25 min，30% B;25～26 min，30%～90% B;26～40 min，90% B。流速1 mL·min-1;柱温室温;蒸发光散射检测器漂移管温度70 ℃、雾化器流速2.0 L·min-1;进样量10 μL。在上述色谱条件下，各成分峰之间分离度良好，理论板数按β-谷甾醇计算应不低于5 000。空白溶剂无干扰。色谱图见图1。
1.β-谷甾醇;2. 豆甾醇。
图1 阿萨伊油(A)和对照品(B)的HPLC-ELSD图
Fig.1 HPLC-ELSD chromatograms of sample solution(A) and standard solution(B)
2.1.2 对照品溶液的制备 分别取对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1 mL含β-谷甾醇、豆甾醇均约为0.25 mg的混合对照品溶液。, 百拇医药(贺成 李伟 张建军 屈胜胜 李佳静 王林元)
[关键词] 阿萨伊; 高效液相色谱法; β-谷甾醇; 抗氧化剂; 总氧自由基清除能力
, http://www.100md.com
[收稿日期] 2014-09-30
[通信作者] *王林元，硕士，副教授，Tel：(010)64287912，E-mail：wangly@bucm.edu.cn
[作者简介] 贺成，硕士，助理实验师，E-mail：chenghe0121@gmail.com
Euterpe oleracea Mart 是南美洲亚马逊河及其支流流域特有的一种大型棕榈树，它的果实被称作阿萨伊，又称巴西莓(acai)，是一种南美洲传统草药，其果肉、果皮、种子以及果油皆可药用[1]。目前，阿萨伊因较强的抗氧化能力和可作为功能性食品而备受关注。有文献报道，阿萨伊作为一种天然抗氧化剂的新资源，深紫色的成熟果实富含花青素，但研究数据表明花青素对阿萨伊总体抗氧化能力的贡献大约只有10%，显然阿萨伊中存在具有抗氧化能力的未被识别的成分[2-3];对阿萨伊其他类成分的抗氧化活性研究未见报道。本研究进一步对阿萨伊中含量较多的油类成分进行分析，并研究其抗氧化活性。采用阿萨伊果实冻干粉制备阿萨伊油，选择其中具有抗氧化、抗癌、抗炎和降脂活性[4-5]的植物甾醇类成分进行分析并对阿萨伊油的抗氧化活性进行评价。
, 百拇医药
评价成分体外抗氧化能力的方法很多[6-7]，但大都不能反映机体总体抗氧化能力。总氧自由基清除能力(total oxyradical scavenging capacity，TOSC)法是以顶空气相色谱法(headspace gas chromatography，HS-GC)为手段的以评价组分中任何可与氧自由基结合物质的抗氧化能力的指标，本文采用了TOSC法对阿萨伊油整体抗氧化活性进行了研究。
1 材料
Agilent 1100高效液相色谱仪(二极管阵列检测器，Alltech 2000蒸发光散射检测器)，Agilent 6890N气相色谱仪(7694E Headspace Sampler顶空进样器，氢火焰离子化检测器)，顶空进样瓶(安捷伦公司，10 mL);SHZ-88台式水浴恒温振荡器(江苏太仓实验设备厂)。
甲醇(色谱纯，Fisher Scientific);乙腈(色谱纯，Fisher Scientific);异丙醇(色谱纯，Fisher Scientific);4-甲硫基-2-氧丁酸钠(KMBA，Sigma);2，2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(ABAP，Sigma);还原型谷胱甘肽(GSH，Sigma);乙烯标准气体(纯度>99.9%，北京氧利来公司);磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，氢氧化钠，无水乙醇，三氯甲烷，浓硫酸(分析纯，国药试剂公司);β-谷甾醇(纯度>98%)，豆甾醇(纯度>95%)购自上海诗丹德生物技术有限公司。
, 百拇医药
阿萨伊冻干粉产于巴西帕拉州的阿萨伊，果实经过挑选、清洗、软化后，加水旋转搅拌磨碎，去除果核，过0.5 mm筛网后制成果浆，包装，冷冻储存。阿萨伊果浆再经冷冻干燥，制成冻干粉。阿萨伊果浆购自生产商巴西百利公司(Bela lacá Polpas de Frutas Indústria e Comércio Ltda)。阿萨伊冻干粉由美国蒙纳维公司(MonaVie Inc)提供。
阿萨伊油(Petroleum ether extract，PEE)的制备：称取阿萨伊冻干粉，加石油醚索氏提取，旋转蒸发回收溶剂至无石油醚味。得深绿色油状液体，冷藏。平行制备3批，平均收率为45.5%。
2 方法与结果
2.1 β-谷甾醇、总甾醇的含量测定
2.1.1 色谱条件和系统适用性试验 Purosper STAR LP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相乙腈(A)-异丙醇(B)梯度洗脱，0～25 min，30% B;25～26 min，30%～90% B;26～40 min，90% B。流速1 mL·min-1;柱温室温;蒸发光散射检测器漂移管温度70 ℃、雾化器流速2.0 L·min-1;进样量10 μL。在上述色谱条件下，各成分峰之间分离度良好，理论板数按β-谷甾醇计算应不低于5 000。空白溶剂无干扰。色谱图见图1。
1.β-谷甾醇;2. 豆甾醇。
图1 阿萨伊油(A)和对照品(B)的HPLC-ELSD图
Fig.1 HPLC-ELSD chromatograms of sample solution(A) and standard solution(B)
2.1.2 对照品溶液的制备 分别取对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1 mL含β-谷甾醇、豆甾醇均约为0.25 mg的混合对照品溶液。, 百拇医药(贺成 李伟 张建军 屈胜胜 李佳静 王林元)