红大戟中的蒽醌和三萜类化学成分(1)
[摘要] 运用硅胶、MCI、Sephadex LH-20柱色谱及半制备型HPLC等色谱方法，从红大戟95%乙醇提取物中分离得到9个化合物， 通过理化性质和NMR、MS等波谱数据鉴定化合物的结构为1，3-二羟基-2-羧基-9，10-蒽醌(1)， 1-甲氧基-3，6-二羟基-2-羟甲基-9，10-蒽醌(2)， 1，2，3-三羟基-9，10-蒽醌(3)， 阿江榄仁酸(4)， 2α，3β，24-三羟基齐墩果-12-烯-28-酸(5)， 2α，3β，19α，24-四羟基乌苏-12-烯-28-酸(6)， 2α，3β，24-三羟基乌苏酸(7)， 2α，3β，23-三羟基乌苏-12-烯-28-酸(8)和胡萝卜苷(9)。化合物1～9均为首次从该属植物中分离得到。
[关键词] 红大戟； 蒽醌； 三萜； 化学成分
红大戟Knoxia roxburghii(Sprengel)[1]， 原称K. valerianoides， 为茜草科Rubiaceae红芽大戟属植物， 多年生草本， 分布于我国南部多个省份， 主产于广西。红大戟的块根入药， 有泻水逐饮、攻毒消肿散结的功效； 主治胸腹积水、二便不利、痈肿疮毒等症[2]。红芽大戟属药用植物主要含有蒽醌、黄酮苷和色原酮苷类成分， 药理活性研究报道较少[3]。前期工作从红大戟中得到蒽醌、三萜、木脂素、香豆素、甾酮等成分， 体外活性筛选实验结果表明， 部分蒽醌具有抑制巨噬细胞分泌NO及肝细胞损伤保护活性[3-6]。为进一步寻找红大戟中的活性成分， 本实验对其95%乙醇提取物进行系统研究， 从中得到9个化合物， 均为首次从该属植物中分离得到， 本文报道它们的分离和结构鉴定。
, 百拇医药
1 材料
质谱用VG Autospec 3000型质谱仪测定；NMR用Bruker Avance Ⅲ 500核磁共振仪测定， TMS作内标；MCI树脂为Mitsubishi Chemical 公司生产；凝胶Sephadex LH-20为Amersham Pharmacia公司生产；柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产；薄层色谱板为烟台江友硅胶发展有限公司生产；Waters 600型高效液相色谱仪， Ultimate XB-C18色谱柱(20 mm×250 mm，5 μm)， Waters 2489检测器；所用试剂均为分析纯或色谱纯。红大戟药材购自河北省安国中药市场， 经中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为红大戟K. roxburghii， 标本现存于中国医学科学院药物研究所植物标本室， 标本号为HDJ070413。
2 提取与分离
红大戟的干燥块根20 kg， 用95%乙醇超声提取3次， 减压浓缩得浸膏3.9 kg，将其分散于4 L水中， 用乙酸乙酯萃取3次， 得乙酸乙酯萃取部分400 g。该部分用硅胶柱色谱分离， 石油醚-丙酮梯度洗脱得到9个部分(Fr.1～Fr.9)。
, 百拇医药
Fr.6(30 g)用硅胶柱色谱分离， 氯仿-甲醇梯度洗脱得到7个小部分(Fr.6-1～Fr.6-7)。Fr.6-5(4.7 g)用甲醇溶解， 经MCI树脂充分吸附后， 用甲醇-水梯度洗脱。60%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20(150 g， 石油醚-氯仿-甲醇5∶5∶1)柱色谱分离， 再经半制备型HPLC(甲醇-水67∶33)纯化得到化合物6(13.2 mg)。70%甲醇洗脱部分用凝胶(石油醚-氯仿-甲醇5∶5∶1)柱色谱分离得到2个小部分(M-70-1和M-70-2)， M-70-1(50 mg)用半制备型HPLC(甲醇-水85∶15)分离得到化合物5(14.4 mg)和7(15.4 mg)， M-70-2(42 mg)用半制备型HPLC(甲醇-水 80∶20)分离得到化合物4(19.3 mg)和8(6.4 mg)。Fr.6-6浓缩过程中析出白色沉淀， 过滤并用甲醇反复洗涤得到化合物9(200 mg)。
Fr.7(20 g)用甲醇溶解， 经MCI树脂充分吸附后， 用甲醇-水梯度洗脱。60%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20(150 g， 氯仿-甲醇1∶1)柱色谱分离， 得到化合物1(6 mg)， 70%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20(150 g， 氯仿-甲醇1∶1)柱色谱分离， 得到化合物2(8 mg)和3(10 mg)。
, 百拇医药
3 结构鉴定
化合物1 橙红色无定形粉末；ESI-MS m/z 283[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：6.94(1H，s，H-4)，8.13(1H，d，J=7.5 Hz，H-5)，7.89(1H，t，J=7.5 Hz，H-6)，7.80(1H，t，J=7.6 Hz，H-7)，8.10(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz) δ：167.1(C-1)，111.4(C-2)，168.4(C-3)，106.1(C-4)，137.3(C-4a)，126.9(C-5)，135.0(C-6)，133.3(C-7)，126.5(C-8)，132.6(C-8a)，183.6(C-9)，108.1(C-9a)，179.7(C-10)，135.6(C-10a)，174.9(C-11)。以上数据与文献[7]报道的一致，故鉴定化合物1为1，3-二羟基-2-羧基-9，10-蒽醌(munjistin)。
, 百拇医药 化合物2 橙黄色无定形粉末；ESI-MS m/z 299[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.48(1H，s，H-4)，7.41(1H，d，J=2.6 Hz，H-5)，7.22(1H，dd，J=8.5，2.6 Hz，H-7)，8.03(1H，d，J=8.5 Hz，H-8)，4.56(2H，br s，H-11)，3.84(3H，s，1-OMe)，10.81(1H，s，3-OH)，11.06(1H，br s，6-OH)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：162.0(C-1)，129.3(C-2)，162.1(C-3)，110.2(C-4)，136.0(C-4a)，111.7(C-5)，162.4(C-6)，122.2(C-7)，130.1(C-8)，127.2(C-8a)，179.8(C-9)，118.3(C-9a)，183.2(C-10)，134.5(C-10a)，62.8(C-11)，52.6(1-OMe)。以上NMR数据与文献[8]报道的一致，故鉴定化合物2为1-甲氧基-3，6-二羟基-2-羟甲基-9，10-蒽醌(1-methoxy-3，6-dihydroxy-2-hydroxymethyl-9，10-anthraquinone)。, 百拇医药(洪一郎 马丽 王垣芳 孙居锋 侯桂革 赵峰 韩景田 王春华)
[关键词] 红大戟； 蒽醌； 三萜； 化学成分
红大戟Knoxia roxburghii(Sprengel)[1]， 原称K. valerianoides， 为茜草科Rubiaceae红芽大戟属植物， 多年生草本， 分布于我国南部多个省份， 主产于广西。红大戟的块根入药， 有泻水逐饮、攻毒消肿散结的功效； 主治胸腹积水、二便不利、痈肿疮毒等症[2]。红芽大戟属药用植物主要含有蒽醌、黄酮苷和色原酮苷类成分， 药理活性研究报道较少[3]。前期工作从红大戟中得到蒽醌、三萜、木脂素、香豆素、甾酮等成分， 体外活性筛选实验结果表明， 部分蒽醌具有抑制巨噬细胞分泌NO及肝细胞损伤保护活性[3-6]。为进一步寻找红大戟中的活性成分， 本实验对其95%乙醇提取物进行系统研究， 从中得到9个化合物， 均为首次从该属植物中分离得到， 本文报道它们的分离和结构鉴定。
, 百拇医药
1 材料
质谱用VG Autospec 3000型质谱仪测定；NMR用Bruker Avance Ⅲ 500核磁共振仪测定， TMS作内标；MCI树脂为Mitsubishi Chemical 公司生产；凝胶Sephadex LH-20为Amersham Pharmacia公司生产；柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产；薄层色谱板为烟台江友硅胶发展有限公司生产；Waters 600型高效液相色谱仪， Ultimate XB-C18色谱柱(20 mm×250 mm，5 μm)， Waters 2489检测器；所用试剂均为分析纯或色谱纯。红大戟药材购自河北省安国中药市场， 经中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为红大戟K. roxburghii， 标本现存于中国医学科学院药物研究所植物标本室， 标本号为HDJ070413。
2 提取与分离
红大戟的干燥块根20 kg， 用95%乙醇超声提取3次， 减压浓缩得浸膏3.9 kg，将其分散于4 L水中， 用乙酸乙酯萃取3次， 得乙酸乙酯萃取部分400 g。该部分用硅胶柱色谱分离， 石油醚-丙酮梯度洗脱得到9个部分(Fr.1～Fr.9)。
, 百拇医药
Fr.6(30 g)用硅胶柱色谱分离， 氯仿-甲醇梯度洗脱得到7个小部分(Fr.6-1～Fr.6-7)。Fr.6-5(4.7 g)用甲醇溶解， 经MCI树脂充分吸附后， 用甲醇-水梯度洗脱。60%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20(150 g， 石油醚-氯仿-甲醇5∶5∶1)柱色谱分离， 再经半制备型HPLC(甲醇-水67∶33)纯化得到化合物6(13.2 mg)。70%甲醇洗脱部分用凝胶(石油醚-氯仿-甲醇5∶5∶1)柱色谱分离得到2个小部分(M-70-1和M-70-2)， M-70-1(50 mg)用半制备型HPLC(甲醇-水85∶15)分离得到化合物5(14.4 mg)和7(15.4 mg)， M-70-2(42 mg)用半制备型HPLC(甲醇-水 80∶20)分离得到化合物4(19.3 mg)和8(6.4 mg)。Fr.6-6浓缩过程中析出白色沉淀， 过滤并用甲醇反复洗涤得到化合物9(200 mg)。
Fr.7(20 g)用甲醇溶解， 经MCI树脂充分吸附后， 用甲醇-水梯度洗脱。60%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20(150 g， 氯仿-甲醇1∶1)柱色谱分离， 得到化合物1(6 mg)， 70%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20(150 g， 氯仿-甲醇1∶1)柱色谱分离， 得到化合物2(8 mg)和3(10 mg)。
, 百拇医药
3 结构鉴定
化合物1 橙红色无定形粉末；ESI-MS m/z 283[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：6.94(1H，s，H-4)，8.13(1H，d，J=7.5 Hz，H-5)，7.89(1H，t，J=7.5 Hz，H-6)，7.80(1H，t，J=7.6 Hz，H-7)，8.10(1H，d，J=7.5 Hz，H-8)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz) δ：167.1(C-1)，111.4(C-2)，168.4(C-3)，106.1(C-4)，137.3(C-4a)，126.9(C-5)，135.0(C-6)，133.3(C-7)，126.5(C-8)，132.6(C-8a)，183.6(C-9)，108.1(C-9a)，179.7(C-10)，135.6(C-10a)，174.9(C-11)。以上数据与文献[7]报道的一致，故鉴定化合物1为1，3-二羟基-2-羧基-9，10-蒽醌(munjistin)。
, 百拇医药 化合物2 橙黄色无定形粉末；ESI-MS m/z 299[M-H]-。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：7.48(1H，s，H-4)，7.41(1H，d，J=2.6 Hz，H-5)，7.22(1H，dd，J=8.5，2.6 Hz，H-7)，8.03(1H，d，J=8.5 Hz，H-8)，4.56(2H，br s，H-11)，3.84(3H，s，1-OMe)，10.81(1H，s，3-OH)，11.06(1H，br s，6-OH)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：162.0(C-1)，129.3(C-2)，162.1(C-3)，110.2(C-4)，136.0(C-4a)，111.7(C-5)，162.4(C-6)，122.2(C-7)，130.1(C-8)，127.2(C-8a)，179.8(C-9)，118.3(C-9a)，183.2(C-10)，134.5(C-10a)，62.8(C-11)，52.6(1-OMe)。以上NMR数据与文献[8]报道的一致，故鉴定化合物2为1-甲氧基-3，6-二羟基-2-羟甲基-9，10-蒽醌(1-methoxy-3，6-dihydroxy-2-hydroxymethyl-9，10-anthraquinone)。, 百拇医药(洪一郎 马丽 王垣芳 孙居锋 侯桂革 赵峰 韩景田 王春华)