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编号:12643348
鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究(2)
http://www.100md.com 2014年9月1日 中国中药杂志 2014年第17期
     PR =A实验组/A溶剂对照组×100%

    2.3 细胞周期测定 取经无酚红DMEM(含5%CDT-FBS)培养4 d的T47D细胞,以5×105个/瓶的密度接种于25 cm2的培养瓶中,以无血清DMEM接种24 h待细胞贴壁后,换为含1×10-8 mol·L-1 雌二醇、1×10-5 mol·L-1或1×10-6 mol·L-1鼠尾草酚的DMEM培养液继续培养。48 h后终止培养,收获细胞用70%冷乙醇4 ℃固定过夜,RNase处理,PI染色,2 h内用流式细胞仪检测细胞周期分布,并计算细胞增殖指数(proliferation index,PI)。

    PI =(S+G2M )/(G0/G1+S+G2M)×100%

    2.4 Western blot检测细胞ERα,ERβ蛋白表达 细胞预处理过程同2.3。药物作用48 h后,收集细胞,加入细胞裂解液并以14 000×g离心20 min,将上清部分进行蛋白含量测定后用于免疫印迹分析。蛋白变性后上样,SDS-PAGE电泳(浓缩胶80 V,分离胶120 V) ......
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