大苞雪莲石油醚部位对缺氧大鼠脑组织的保护作用及其机制研究(2)
2.3组织形态观察和免疫组化染色 脑组织彻底固定后，常规石蜡包埋、切片、苏木素-伊红(HE)染色，镜下观察。进行HIF-1α免疫组化染色时，按操作说明书依次进行H2O2处理、抗原修复和封闭处理，滴加1∶200稀释的HIF-1α一抗，湿盒内4 ℃冰箱过夜，次日经PBS洗涤、滴加二抗和37 ℃孵育15 min后，加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP)37 ℃孵育15 min，DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片，镜下观察。阴性对照切片用PBS液代替一抗，其余步骤相同。2.4Real-time RT-PCR法检测基因表达 常规Trizol法提取脑组织总RNA，检测纯度和浓度达到要求后，用TakaRa Prime ScriptTM reagent Kit将总RNA反转录为cDNA。按SYBR Premix Ex TaqTMII说明书添加PCR反应体系，进行缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、促红细胞生成素(EPO)、血红素加氧酶(HO-1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase-3)和GAPDH的cDNA扩增 ......
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