2 方法

    木香、川木香、土木香和马兜铃的干燥根均用75%乙醇擦拭药材表面后，刮去外表皮，取根的内部约45 mg，用DNA 提取研磨仪 (Retsch MM400，Germany) 研磨2 min(30 次/s) 后，水浴56 ℃8～12 h。利用植物基因组DNA提取试剂盒 (Tiangen Biotech Co.，China) 提取总DNA。提取过程中，氯仿-异戊醇(24∶1)抽提2次，沉淀DNA步骤时，用-20 ℃预冷的异丙醇沉淀DNA ，摇匀，放入-20 ℃冰箱冷冻30 min，用50 μL水洗脱。叶片的DNA提取方法完全按照Chen等^[25]研究的方法。PCR 扩增、测序引物正向ITS2F为5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′，反向ITS3R为5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′ ^[25]。 PCR 反应体积为25 μL，体系内包含PCRmix 12.5 μL，2.5 μmol·L-1引物各1 μL，模板DNA 约 20～100 ng。扩增程序： 94 ℃变性5 min；再进行40个循环 (94 ℃变性30 s ......