15种中药材表面污染真菌的分离与分子鉴定_3结果

15种中药材表面污染真菌的分离与分子鉴定(2)

http://www.100md.com 2013年6月15日《中国中药杂志》 2013年第12期

     2.3.3 PCR扩增及产物测序 PCR反应体系：2×Power Pfu PCR Master Mix缓冲液25 μL，10 μmoL·L^-1引物各5 μL，真菌基因组DNA 5 μL，ddH₂O加至50 μL。PCR反应程序：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s；52～58 ℃退火30 s；72 ℃延伸30 s；72 ℃最后延伸10 min；35个循环；4 ℃保存。PCR扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检查，并送华大基因公司测序。

    2.3.4 DNA序列比对及分析登陆NCBI/BLAST(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)，测序结果进行Blast(nucleotide blast)检索，找出与获得片段同源性最高的真菌菌株的参考序列。

    污染率=分离出真菌的药材数目总的检测药材数目×100%

    3 结果

    3.1 中药材表面污染真菌分离与纯化

    按前文所述方法 ......

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