2.3 下丘脑GnRH，Kiss-1和GPR54 mRNA表达水平测定 大鼠处死后，冰上迅速取出脑组织并分离出下丘脑，-80 ℃冻存。采用TRIzol法提取组织总RNA，紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度，A260/A280在1.8～2.0入选进行逆转录。逆转录与PCR扩增：逆转录总反应体系20 μL，42 ℃反应60 min，70 ℃反应15 min；PCR扩增总反应体系25 μL，94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s；目的基因扩增30个循环，最后72 ℃延伸5 min。10 μL的PCR产物上样于2%的琼脂糖凝胶，电压为70 V。应用Alpha Innotech FC2型凝胶图像分析软件进行条带吸光度分析，用目的基因与β-actin基因条带积分吸光度比值表示GnRH，GPR54和Kiss-1 mRNA的相对表达水平。

    2.4 统计学方法 数据以±s表示，采用单因素方差分析，组间数据统计采用t检验，计数数据采用卡方检验。P<0.05为差异有显著意义 ......