2.4 内生真菌抗稻瘟霉活性初筛

    2.4.1 发酵产物制备 挑取少量菌种接种到PDA培养基上，28 ℃活化3 d，挑取适量菌丝体接种到装有250 mL 液体培养基的500 mL三角瓶中，于28 ℃，120 r·min^-1条件下摇床培养10 d，发酵液经乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，浓缩备用。

    2.4.2 抗稻瘟霉活性测定[17] 稻瘟霉菌种接种在PDA斜面上，28 ℃培养7～10 d。适量无菌水刮取孢子，滤除菌丝，得到孢子悬浮液，加入2%酵母提取液300 μL。样品分别用10%甲醇溶液稀释，取50 μL加入96孔微量板第1行中；以甲醇为阴性对照，阴性对照孔每孔加10%甲醇50 μL；空白对照孔每孔加50 μL无菌水；阳性对照为50 μL酮康唑。所有孔均加孢子悬液50 μL，上述试样及对照组均进行倍半稀释，使最终浓度分别为500，250，125，62.5，31.3，15.6，7.8 mg·L^-1。将96孔板于27 ℃，85%湿度下培养14～16 h，用倒置显微镜观察孢子萌发和菌丝变形情况，以不再抑制稻瘟霉生长作为判断终点 ......