甘草3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶基因多态性与甘草酸含量的相关性分析(2)
2.3 PCR产物的回收、与载体连接、转化及测序 将PCR产物切胶回收，16 ℃与克隆载体pMD19-T连接12～16 h，得到重组质粒pMD-HMGR。向50 μL E.coli DH5α感受态细胞悬液中加入上述重组质粒5 μL，采用冻融法进行转化[8]。转化后加入500 μL无抗生素的LB培养基，于37 ℃，220 r·min-1条件下振荡培养45 min，使菌体复苏。吸取100 μL上述菌液涂布于含有Amp(50 mg·L-1)的LB固体培养基上，37 ℃恒温箱中培养24 h。挑取单菌落，转入含Amp(50 mg·L-1)的LB液体培养基中，37 ℃，220 r·min-1振荡培养过夜。取1 μL菌液为模板直接用于PCR，琼脂糖凝胶电泳检测。取检测为阳性的菌液送样，测序由上海生工生物工程有限公司完成。同时，留500 μL菌液加等体积30%甘油，-80 ℃长期保存。为保证测序结果的准确性和代表性 ......
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