龙骨马尾杉环阿屯醇合成酶(HcCAS1)基因的克隆和生物信息学分析(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
2方法
2.1龙骨马尾杉中甾醇类合成途径关键酶的搜索和分析
Luo等[11]报道了通过454高通量测序方法获得了野生龙骨马尾杉根、茎、叶的转录组信息，将所得高质量的测序序列(reads)进行拼接获得独立基因(unigenes)，通过将这些独立基因与Swissprot蛋白数据库、非冗余核酸数据库 (Nt)、非冗余蛋白数据库(Nr)和KEGG数据库等公共数据库进行比对，对其进行功能注释。本研究通过“CAS”关键词搜索龙骨马尾杉的转录组数据，初步筛选获得候选基因序列，然后将候选序列在Swissprot蛋白数据库进行BLAST比对分析，阈值设为1×10-10。
2.2RNA的提取和cDNA合成
取龙骨马尾杉根、茎、叶3组织部位的材料，在液氮中混合研磨，依据百泰克公司多糖多酚植物RNA提取试剂盒说明书提取龙骨马尾杉总RNA，利用NanoDrop2000 进行含量测定和1% 琼脂糖电泳检测RNA完整性。利用无RNA 酶的脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)对所提取的RNA进行消化，去除样品中的脱氧核糖核酸 (DNA)。利用TaKaRa 公司PrimeScript反转录酶将龙骨马尾杉的RNA 反转录为第一链互补链DNA(cDNA)。反转录的反应条件及程序均按照Takara公司的PrimeScript反转录试剂盒说明书进行。
2.3HcCAS1基因的克隆
依据其两端序列利用Primer Premier5 软件设计引物 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。