2.2 DC特异性表面分子检测

    采用流式细胞术检测。取“2.1”项下经纯化的CD11c+imDC适量，以1×106个/mL的密度按1 mL/孔接种于24孔板中，将细胞随机分为imDC组、空载组、阳性组(托法替尼，1 μmol/L;剂量设置参考既往研究[14]，为最大安全、有效剂量)以及PO-296低、中、高剂量组(1、5、25 μmol/L;剂量设置参考本课题组前期预试验结果)，每组设3个复孔。吸弃上清液，imDC组和空载组加入完全培养基1 mL，各给药组加入含相应药物的完全培养基1 mL。培养6 h后，除imDC组外，其余各组均加入最终质量浓度为0.1 μg/mL的LPS刺激24 h。收集细胞，以300×g离心5 min后，弃去上清液，沉淀用4 ℃预冷的PBS 1 mL清洗，以300×g离心5 min，沉淀分别加入BV 421-MHC Ⅱ、FITC-CD80、PE-CD86、Alexa Fluor 647-CCR7适量，于4 ℃避光孵育30 min ......