2.2.3 阴性样品溶液的制备 (1)阴性样品溶液Ⅰ的制备。取连翘阴性样品Ⅰ粉末0.7 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。(2)阴性样品溶液Ⅱ的制备。取连翘阴性样品Ⅱ粉末3.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。(3)双阴性样品溶液的制备。取连翘和姜半夏双阴性样品粉末3.0 g，精密称定，按照供试品溶液Ⅰ的制备方法制备，即得。

    2.2.4 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Diamonsil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈-0.2%甲酸溶液，梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为278 nm;柱温为30 ℃;进样量为10或20 μL。梯度洗脱程序见表1。

    精密吸取混合对照品贮備溶液10 μL，供试品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及阴性样品溶液Ⅰ、Ⅱ和双阴性样品溶液各20 μL，注入液相色谱仪中，结果阴性样品溶液对主要成分峰均未见干扰。理论板数按连翘酯苷A、连翘苷峰计应分别不低于5 000、3 000。色谱图见图1。

    2.2.5 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下的混合对照品贮备溶液0.2、0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 mL，置于5 mL量瓶中，分别制备成连翘酯苷A为0.061 0、0.152 5、0.244 0、0.305 0、0.457 5、0.610 0 mg/mL ......