2.5 重组蛋氨酸酶对GLC细胞抑制率的检测

    采用MTT法检测两种重组蛋氨酸酶对GLC细胞的抑制作用，并计算细胞抑制率[14]，试验重复3次。将GLC细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基(以下简称“完全培养基”)中，置37 ℃、5%CO2的培养箱中培养(下同)。取对数生长期的GLC细胞适量，以完全培养基重悬后，按5×103个/mL接种于96孔培养板(每孔100 μL)中，培养过夜。将细胞随机分为空白组(无细胞、无药物)、对照组(有细胞、无药物)和4A1-MGL、3B8- MGL不同剂量组(均设置低、中、高剂量，分别为0.1、0.2、0.4 U/mL，以完全培养基为溶剂；剂量设置参考文献[15])，每组设置5个复孔。空白组、对照组分别加入完全培养基100 μL，各给药组加入含相应药物的完全培养基100 μL，分别于培养24、48、72 h时，弃去培养基，每孔加入5 mg/mL MTT溶液10 μL，继续培养4 h后，吸弃上清液，每孔加入DMSO 150 μL，振荡10 min。以酶标仪于490 nm处测定各孔OD490 nm值 ......