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编号:13560865
稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型的建立(3)
http://www.100md.com 2019年3月1日 《新医学》 20193
     若感染效率达80%以上,即应用流式细胞仪检测3组细胞的病毒转染阳性率(GFP)及实验组和对照组IL-9表达情况。将3组细胞消化、离心、重悬后,室温、暗室、固定20 min,破膜,加入IL-9抗体(上海西格玛奥德里奇贸易有限公司),抗体与100μl的1×Perm Wash Buffer按1∶100使用,4℃、避光,孵育30 min,离心后弃上清,Hanks重悬细胞,转移至流式管上流式细胞仪检测。

    同时,用qRT-PCR法检测3组细胞中IL-9的mRNA表达情况。提取3组细胞的总RNA后,使用Prime ScriptRT Master 试剂盒行逆转录反应,反应程序:37℃ 15 min,85℃ 15 s,4℃ 1 min,使RNA逆转录成cDNA。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参,反应程序:95℃ 5 min,95℃10 s,60℃ 30 s,共40个循环,进行PCR扩增。根据仪器自动计算所得每组标本的Ct值,计算目的基因mRNA的相对表达量2-ΔΔCt,△△Ct=实验组△Ct -对照组△Ct,△Ct=目的基因Ct值-內参Ct值 ......
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