四、方 法

    1.感染模型构建

    感染模型的构建参考既往研究成果[9]。红色毛癣菌T1a接种于马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，27℃培养14 d，连续活化2次以上，每管加入3 ～ 4 ml的0.85%无菌生理盐水，用接种环轻轻刮取菌落表面，收集孢子和菌丝的混合悬液。用11 μm孔径的无菌Whatman滤纸过滤得到孢子悬液。用0.85%无菌生理盐水清洗2次，4 000 rpm，离心10 min，弃去上清液，加适量0.85%无菌生理盐水重悬沉淀的孢子。用细胞计数板进行孢子计数，制成终浓度分别为8×104 cfu/ml的孢子悬液备用。在人工表皮的中央垂直加入5 μl混匀的孢子悬液(400个孢子)构建感染模型，加等量的无菌生理盐水作阴性对照。37℃，5% CO2培养，每2 d更换维持培养基。

    2.人工表皮角质形成细胞转录组测序

    RNA提取：感染后96 h，分离人工表皮，采用Trizol法提取总RNA，随后使用Illumina HiSeq平台进行RNA-seq测序。本研究中采用RPKM(Reads Per Kilobase Millon mapped reads)来表示基因表达量水平 ......