透皮吸收促进剂对青龙贴中麻黄生物碱透皮吸收的影响
作者：张奇 邓英杰 刘令勉
单位：张奇(沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110015)；邓英杰(沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110015)；刘令勉(黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词：中药透皮吸收；透皮促进剂；青龙贴；小青龙汤▲
中国中药杂志000308 摘 要：目的：将临床有效治疗哮喘的小青龙汤剂型改革制成贴片制剂——青龙贴。方法：采用添加透皮吸收促进剂促进中药有效成分吸收。利用青龙贴的体外释放和皮肤透过实验确定皮肤为药物迁移的限速屏障。对月桂氮酮、丙二醇、冰片、薄荷油4种透皮吸收促进剂单独应用和任意两种合用的促进效果进行考察。结果：月桂氮酮和丙二醇合用促进效果最优，并由实验确定两者最佳促进效果时的浓度。结论：透皮促进剂对中药透皮同样有促进作用。
哮喘是东北常见病、多发病，病程长，缠绵难愈，需长期治疗。小青龙汤是《伤寒论》中的经典有效方。在原方麻黄、乌头、芍药、蜈蚣、五味子、甘草等的基础上加味其他中药制成青龙膏，临床有效。但它容易污染衣物，剂量控制不准，使用很不方便。为此，我们以经皮吸收理论为指导，以实验为基础，将青龙汤改制成青龙贴剂，并采用添加透皮促进剂的方法提高药物透皮速率。
, 百拇医药
本文以方中君药麻黄中有效成分麻黄生物碱为测定指标，利用紫外分光光度法，对不同透皮促进剂促进药物吸收效果进行考察，确定月桂氮酮和丙二醇分别占药液总体积2%和20%时，促进效果最好。为中药剂型改革提供了参考。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 药品及试剂 经作者鉴定,青龙贴方中麻黄为麻黄科木贼麻黄Ephedra equisetina Bge.的干燥草质茎；制草乌为毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffi Reichb.的干燥块根炮制品;赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；五味子为木兰科北五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实；磷酸二氢钾、邻苯二甲酸氢钠、溴麝香草酚兰、氯仿均为分析纯；721-A型紫外分光光度计(浙江仪表厂)；Franz扩散池(自制)；盐酸麻黄碱(北京市药品检验所)。
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1.1.2 工艺流程 麻黄用酸水单煎。乌头、蜈蚣、芍药、甘草、五味子等10倍量水煎2次，总煎液与麻黄煎液合并，静置，滤过。滤液醇沉，得上清液，上清液减压浓缩，加入适量透皮促进剂、胶液等基质，搅匀，按混合法制备贴片。每贴6 cm×6 cm，含生药11.73 g。
1.1.3 鼠皮制备 健康Wister大鼠，雌雄不限，体重150～200 g(黑龙江中医药大学实验动物中心)，用剃须刀将鼠背部毛小心剃除，冲洗干净，将大鼠处死，剪下背部皮肤，剥离皮下脂肪及粘液组织，选取完整皮肤,用生理盐水冲洗干净，冰箱贮存，备用[1]。
1.2 方法
1.2.1 标准曲线制备 用盐酸麻黄碱对照品标准液(1.93 mg.ml-1)10，20，30，40，50，60 μl,按文献[2]方法操作，得标准曲线回归方程A=0.003691C+0.0065，r=0.9999。盐酸麻黄碱在1.93～11.5 μg.ml-1范围内吸收度与浓度呈线性关系。
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1.2.2 精密度 配制1.93，5.79，9.65 μg.ml-13个浓度的盐酸麻黄碱标准液，按标准曲线方法处理，每个样品每日测5次，计算日内误差，RSD0.11%～0.25%。连续测4 d，计算日间误差，RSD 0.19%～0.66%。本法重现性和精密度很好，符合实验要求。
1.2.3 样品测定方法 在一定时间间隔从Franze扩散池的接受液中取样1 ml，定容至10 ml，取3 ml置分液漏斗中，依标准曲线做法，加入缓冲液等，显色,萃取，λ 418 nm测吸收度。
1.3 限速屏障确定
1.3.1 体外释放实验 将青龙贴(厚0.08 mm,d=2.2 cm)贴置于Franz扩散池之间，药膜朝向接受液，接受液为10 ml生理盐水，磁力搅拌器搅300 r.min-1，温度由恒温水浴维持在(37±1) ℃，在一定的时间间隔从接受池中部取样1 ml，同时补加同体积生理盐水，样品用紫外分光光度计测定。
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1.3.2 贴片经皮渗透实验 将贮备鼠皮蒙于扩散池口(d=2.2 cm)，青龙贴紧密贴置于扩散池口的皮肤上，接受池中装入10 ml蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
1.3.3 消除测定中的干扰 共存的麻黄生物碱和其他成分对所测麻黄生物碱的干扰较大，样品测定过程中，随行制备一份不含麻黄的处方做对照，与样品平行操作，以对照的样品的渗透扩散接受液为所测样品的空白对照液，以消除干扰。
1.4 透皮促进剂促进效果考察
1.4.1 单用促进效果考察 将贮备鼠皮蒙于双室扩散池之间，有效扩散面积为6.033 cm2。取5份5 ml青龙膏浓缩液(相当于10 g生药)，其中4份按体积比分别加入2%冰片、薄荷油、月桂氮酮、丙二醇4种透皮促进剂，一份空白。将混合好药膏加入扩散池中，接受池中加蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
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1.4.2 任意两者合用促进效果考察 取6份青龙膏浓缩液，按体积比加入6种不同组成的透皮促进剂，分别为：2%月桂氮酮和2%丙二醇；2%月桂氮酮和2%冰片；2%月桂氮酮和2%薄荷油；2%丙二醇和2%冰片；2%丙二醇和2%薄荷油；2%薄荷油和2%冰片。将混合好药膏加入夹有鼠皮的扩散池中，接受池中加蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
1.4.3 最佳促进剂浓度确定 取4份青龙膏浓缩液，分别按体积比(2%∶2%)，(2%∶10%)，(2%∶20%)，(2%∶40%)加入月桂氮酮和丙二醇，混合均匀后将药膏加入扩散池中，接受池中加蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
2 结果
2.1 青龙贴体外释放实验与经皮渗透实验所得累积透皮量与时间回归方程同一坐标中比较，如图1。
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图1 青龙贴不同渗透途径
1.体外释放 2.经皮渗透
可见青龙贴体外释药速率远大于经皮渗透速率，说明皮肤为药物迁移的主要限速屏障和真正限速环节，青龙贴为皮控型制剂，促进药物透皮吸收是提高疗效的关键。
2.1.1 4种不同透皮促进剂：月桂氮酮、丙二醇、冰片、薄荷油，促进药物累积透皮量与时间关系回归方程同一坐标中比较，如图2。
图2 不同透皮促进剂对麻黄生物碱的透皮促进效果
1.月桂氮酮 2.冰片 3.薄荷油
4.丙二醇 5.无透皮促进剂
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由此可见4种透皮促进剂对药物迁移都有一定程度的促进作用，作用效果依次为月桂氮酮>冰片>薄荷油>丙二醇。
2.1.2 两种透皮促进剂均以体积比(2%∶2%)的比例合用，促进药物累积透皮量与时间关系回归方程同一坐标中比较，如图3。
由图3可见，当月桂氮酮和丙二醇合用促进药物透皮吸收效果最好。并且，药物透皮速率大于不同透皮促进剂单独应用时的促进效果。
图3 不同透皮促进剂合用对麻黄生物碱的透皮促进效果
1.月桂氮酮和丙二醇 2.月桂氮酮和冰片
3.月桂氮酮和薄荷油 4.丙二醇和冰片
, 百拇医药 5.丙二醇和薄荷油 6.冰片和薄荷油
2.1.3 最佳促进剂的浓度确定 月桂氮酮与丙二醇合用促进麻黄生物碱透皮吸收时，不知两者浓度有何种配比较好。为此，选择了4种不同比例进行实验。结果如表1。
表1 不同配比月桂氮酮和丙二醇对麻黄生物碱透皮促进作用比较 月桂氮酮∶丙二醇
回归方程
r
透皮速率
/μg.(cm2.h)-1
2%∶2%
Q=533.93+203.99t
, 百拇医药
0.9951
204
2%∶10%
Q=466.21+230.14t
0.9998
230
2%∶20%
Q=430.41+334.67t
0.9941
335
2%∶40%
Q=320.69+221.4t
, http://www.100md.com
0.9887
221
可见随着丙二醇在药液中的占体积比的增加，药物透皮速率变大，但当丙二醇的浓度超过总药液体积量的20%后，药物透皮速率反而下降，当月桂氮酮和丙二醇分别占药液总体积的2%和20%时促进药物透皮效果最好。
3 讨论
药物的透皮吸收过程分为3个阶段：药物从基质中释放、药物穿透角质层屏障、药物通过表皮和真皮被血管吸收[3]。青龙贴为皮控型制剂，增加药物透皮吸收是提高血药浓度的关键，由于条件限制，我们采用简单可行的添加透皮促进剂的方法，不同促进剂作用机理不同，作用效果也不同。通常认为氮酮在角质层贮存，干扰角质层的二级结构，增加类脂极化[4]；而丙二醇不能渗入角质层，由此增加药物在角质层中的溶解性质和分配性质[5]，中药冰片和薄荷油的促进药物透皮作用尚不清楚，可能由于对皮肤的刺激性，使皮下毛细血管扩张，而使药物易于入血。由于中药复方精制后既有大量水溶性成分又有脂溶性成分，而月桂氮酮的脂溶性和丙二醇的水溶性对几乎所有药物的透皮均有促进作用。但丙二醇浓度不宜过高，过高浓度时，细胞间脂质双分子层结构可能受破坏，虽然渗透量增加，但使皮肤受损[6]。
, 百拇医药
由哈尔滨市中医院呼吸病房对制成的青龙贴进行了临床观察，总有效率为93.3%，与小青龙汤水煎液口服相比，小青龙汤总有效率为83.3%，进一步证明了青龙贴是临床治疗哮喘的有效剂型。
临床常用中药多是复方制剂，无论汤药还是制成膏药都有用量大、使用不便和刺激性大的缺点，制成透皮贴片，减少了用药次数，延长作用时间，是一条可供探索的途径，青龙贴的研究为中药剂型改革提供了参考。
参考文献：
[1]阮丽萍，郑俊民.硝苯啶膜剂的研究.药学学报，1992，26：286.
[2]罗国安，兰其田.薄层-酸性染料比色法测定九分散中麻黄碱的含量.中草药，1988，19(6)：13.
[3]郑俊民.药物透皮吸收新剂型.北京：人民卫生出版社，1990.33.
, http://www.100md.com
[4]R Staoughton.Dev and Ind Pharm,1983,9:725.
[5]B Mollgaard,A Heolgaard.Vehicle Effect on Topical Drug Deli-
very Ⅱ Concurrent Skin——Transport of Drugs and Vehicle Components.Acta Pharm Suec,1983,20:443.
[6]梁秉文.经皮给药制剂.北京：中国医学科技出版社，1992.144.
收稿日期：1998-10-26, 百拇医药
单位：张奇(沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110015)；邓英杰(沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110015)；刘令勉(黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词：中药透皮吸收；透皮促进剂；青龙贴；小青龙汤▲
中国中药杂志000308 摘 要：目的：将临床有效治疗哮喘的小青龙汤剂型改革制成贴片制剂——青龙贴。方法：采用添加透皮吸收促进剂促进中药有效成分吸收。利用青龙贴的体外释放和皮肤透过实验确定皮肤为药物迁移的限速屏障。对月桂氮酮、丙二醇、冰片、薄荷油4种透皮吸收促进剂单独应用和任意两种合用的促进效果进行考察。结果：月桂氮酮和丙二醇合用促进效果最优，并由实验确定两者最佳促进效果时的浓度。结论：透皮促进剂对中药透皮同样有促进作用。
哮喘是东北常见病、多发病，病程长，缠绵难愈，需长期治疗。小青龙汤是《伤寒论》中的经典有效方。在原方麻黄、乌头、芍药、蜈蚣、五味子、甘草等的基础上加味其他中药制成青龙膏，临床有效。但它容易污染衣物，剂量控制不准，使用很不方便。为此，我们以经皮吸收理论为指导，以实验为基础，将青龙汤改制成青龙贴剂，并采用添加透皮促进剂的方法提高药物透皮速率。
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本文以方中君药麻黄中有效成分麻黄生物碱为测定指标，利用紫外分光光度法，对不同透皮促进剂促进药物吸收效果进行考察，确定月桂氮酮和丙二醇分别占药液总体积2%和20%时，促进效果最好。为中药剂型改革提供了参考。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 药品及试剂 经作者鉴定,青龙贴方中麻黄为麻黄科木贼麻黄Ephedra equisetina Bge.的干燥草质茎；制草乌为毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffi Reichb.的干燥块根炮制品;赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根；五味子为木兰科北五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实；磷酸二氢钾、邻苯二甲酸氢钠、溴麝香草酚兰、氯仿均为分析纯；721-A型紫外分光光度计(浙江仪表厂)；Franz扩散池(自制)；盐酸麻黄碱(北京市药品检验所)。
, 百拇医药
1.1.2 工艺流程 麻黄用酸水单煎。乌头、蜈蚣、芍药、甘草、五味子等10倍量水煎2次，总煎液与麻黄煎液合并，静置，滤过。滤液醇沉，得上清液，上清液减压浓缩，加入适量透皮促进剂、胶液等基质，搅匀，按混合法制备贴片。每贴6 cm×6 cm，含生药11.73 g。
1.1.3 鼠皮制备 健康Wister大鼠，雌雄不限，体重150～200 g(黑龙江中医药大学实验动物中心)，用剃须刀将鼠背部毛小心剃除，冲洗干净，将大鼠处死，剪下背部皮肤，剥离皮下脂肪及粘液组织，选取完整皮肤,用生理盐水冲洗干净，冰箱贮存，备用[1]。
1.2 方法
1.2.1 标准曲线制备 用盐酸麻黄碱对照品标准液(1.93 mg.ml-1)10，20，30，40，50，60 μl,按文献[2]方法操作，得标准曲线回归方程A=0.003691C+0.0065，r=0.9999。盐酸麻黄碱在1.93～11.5 μg.ml-1范围内吸收度与浓度呈线性关系。
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1.2.2 精密度 配制1.93，5.79，9.65 μg.ml-13个浓度的盐酸麻黄碱标准液，按标准曲线方法处理，每个样品每日测5次，计算日内误差，RSD0.11%～0.25%。连续测4 d，计算日间误差，RSD 0.19%～0.66%。本法重现性和精密度很好，符合实验要求。
1.2.3 样品测定方法 在一定时间间隔从Franze扩散池的接受液中取样1 ml，定容至10 ml，取3 ml置分液漏斗中，依标准曲线做法，加入缓冲液等，显色,萃取，λ 418 nm测吸收度。
1.3 限速屏障确定
1.3.1 体外释放实验 将青龙贴(厚0.08 mm,d=2.2 cm)贴置于Franz扩散池之间，药膜朝向接受液，接受液为10 ml生理盐水，磁力搅拌器搅300 r.min-1，温度由恒温水浴维持在(37±1) ℃，在一定的时间间隔从接受池中部取样1 ml，同时补加同体积生理盐水，样品用紫外分光光度计测定。
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1.3.2 贴片经皮渗透实验 将贮备鼠皮蒙于扩散池口(d=2.2 cm)，青龙贴紧密贴置于扩散池口的皮肤上，接受池中装入10 ml蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
1.3.3 消除测定中的干扰 共存的麻黄生物碱和其他成分对所测麻黄生物碱的干扰较大，样品测定过程中，随行制备一份不含麻黄的处方做对照，与样品平行操作，以对照的样品的渗透扩散接受液为所测样品的空白对照液，以消除干扰。
1.4 透皮促进剂促进效果考察
1.4.1 单用促进效果考察 将贮备鼠皮蒙于双室扩散池之间，有效扩散面积为6.033 cm2。取5份5 ml青龙膏浓缩液(相当于10 g生药)，其中4份按体积比分别加入2%冰片、薄荷油、月桂氮酮、丙二醇4种透皮促进剂，一份空白。将混合好药膏加入扩散池中，接受池中加蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
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1.4.2 任意两者合用促进效果考察 取6份青龙膏浓缩液，按体积比加入6种不同组成的透皮促进剂，分别为：2%月桂氮酮和2%丙二醇；2%月桂氮酮和2%冰片；2%月桂氮酮和2%薄荷油；2%丙二醇和2%冰片；2%丙二醇和2%薄荷油；2%薄荷油和2%冰片。将混合好药膏加入夹有鼠皮的扩散池中，接受池中加蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
1.4.3 最佳促进剂浓度确定 取4份青龙膏浓缩液，分别按体积比(2%∶2%)，(2%∶10%)，(2%∶20%)，(2%∶40%)加入月桂氮酮和丙二醇，混合均匀后将药膏加入扩散池中，接受池中加蒸馏水，以下操作同体外释放实验。
2 结果
2.1 青龙贴体外释放实验与经皮渗透实验所得累积透皮量与时间回归方程同一坐标中比较，如图1。
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图1 青龙贴不同渗透途径
1.体外释放 2.经皮渗透
可见青龙贴体外释药速率远大于经皮渗透速率，说明皮肤为药物迁移的主要限速屏障和真正限速环节，青龙贴为皮控型制剂，促进药物透皮吸收是提高疗效的关键。
2.1.1 4种不同透皮促进剂：月桂氮酮、丙二醇、冰片、薄荷油，促进药物累积透皮量与时间关系回归方程同一坐标中比较，如图2。
图2 不同透皮促进剂对麻黄生物碱的透皮促进效果
1.月桂氮酮 2.冰片 3.薄荷油
4.丙二醇 5.无透皮促进剂
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由此可见4种透皮促进剂对药物迁移都有一定程度的促进作用，作用效果依次为月桂氮酮>冰片>薄荷油>丙二醇。
2.1.2 两种透皮促进剂均以体积比(2%∶2%)的比例合用，促进药物累积透皮量与时间关系回归方程同一坐标中比较，如图3。
由图3可见，当月桂氮酮和丙二醇合用促进药物透皮吸收效果最好。并且，药物透皮速率大于不同透皮促进剂单独应用时的促进效果。
图3 不同透皮促进剂合用对麻黄生物碱的透皮促进效果
1.月桂氮酮和丙二醇 2.月桂氮酮和冰片
3.月桂氮酮和薄荷油 4.丙二醇和冰片
, 百拇医药 5.丙二醇和薄荷油 6.冰片和薄荷油
2.1.3 最佳促进剂的浓度确定 月桂氮酮与丙二醇合用促进麻黄生物碱透皮吸收时，不知两者浓度有何种配比较好。为此，选择了4种不同比例进行实验。结果如表1。
表1 不同配比月桂氮酮和丙二醇对麻黄生物碱透皮促进作用比较 月桂氮酮∶丙二醇
回归方程
r
透皮速率
/μg.(cm2.h)-1
2%∶2%
Q=533.93+203.99t
, 百拇医药
0.9951
204
2%∶10%
Q=466.21+230.14t
0.9998
230
2%∶20%
Q=430.41+334.67t
0.9941
335
2%∶40%
Q=320.69+221.4t
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可见随着丙二醇在药液中的占体积比的增加，药物透皮速率变大，但当丙二醇的浓度超过总药液体积量的20%后，药物透皮速率反而下降，当月桂氮酮和丙二醇分别占药液总体积的2%和20%时促进药物透皮效果最好。
3 讨论
药物的透皮吸收过程分为3个阶段：药物从基质中释放、药物穿透角质层屏障、药物通过表皮和真皮被血管吸收[3]。青龙贴为皮控型制剂，增加药物透皮吸收是提高血药浓度的关键，由于条件限制，我们采用简单可行的添加透皮促进剂的方法，不同促进剂作用机理不同，作用效果也不同。通常认为氮酮在角质层贮存，干扰角质层的二级结构，增加类脂极化[4]；而丙二醇不能渗入角质层，由此增加药物在角质层中的溶解性质和分配性质[5]，中药冰片和薄荷油的促进药物透皮作用尚不清楚，可能由于对皮肤的刺激性，使皮下毛细血管扩张，而使药物易于入血。由于中药复方精制后既有大量水溶性成分又有脂溶性成分，而月桂氮酮的脂溶性和丙二醇的水溶性对几乎所有药物的透皮均有促进作用。但丙二醇浓度不宜过高，过高浓度时，细胞间脂质双分子层结构可能受破坏，虽然渗透量增加，但使皮肤受损[6]。
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由哈尔滨市中医院呼吸病房对制成的青龙贴进行了临床观察，总有效率为93.3%，与小青龙汤水煎液口服相比，小青龙汤总有效率为83.3%，进一步证明了青龙贴是临床治疗哮喘的有效剂型。
临床常用中药多是复方制剂，无论汤药还是制成膏药都有用量大、使用不便和刺激性大的缺点，制成透皮贴片，减少了用药次数，延长作用时间，是一条可供探索的途径，青龙贴的研究为中药剂型改革提供了参考。
参考文献：
[1]阮丽萍，郑俊民.硝苯啶膜剂的研究.药学学报，1992，26：286.
[2]罗国安，兰其田.薄层-酸性染料比色法测定九分散中麻黄碱的含量.中草药，1988，19(6)：13.
[3]郑俊民.药物透皮吸收新剂型.北京：人民卫生出版社，1990.33.
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[4]R Staoughton.Dev and Ind Pharm,1983,9:725.
[5]B Mollgaard,A Heolgaard.Vehicle Effect on Topical Drug Deli-
very Ⅱ Concurrent Skin——Transport of Drugs and Vehicle Components.Acta Pharm Suec,1983,20:443.
[6]梁秉文.经皮给药制剂.北京：中国医学科技出版社，1992.144.
收稿日期：1998-10-26, 百拇医药