当归及其复方透皮吸收特性的研究
作者：魏莉 蔡贞贞 徐莲英
单位：魏莉(上海中医药大学，上海 200032)；蔡贞贞(上海中医药大学，上海 200032)；徐莲英(上海中医药大学，上海 200032)
关键词：当归；配伍；复方；透皮吸收
中国中药杂志000111 摘 要：目的：考察单味当归，当归与常用中药丹参、冰片配伍以及三药组成复方后的透皮特性。方法：以阿魏酸为指标成分，采用体外透皮吸收实验方法和HPLC检测法。结果：当归所含阿魏酸的渗透系数大于单体阿魏酸(P< 0.01)；当归伍用丹参后其所含阿魏酸的渗透系数减小(P< 0.01)；冰片对当归所含阿魏酸具有促透作用(P<0.01)。附方中阿魏酸的渗透系数大于单味当归及当归-丹参、当归-冰片配伍(P< 0.01)。结论：药材所含某一成分透皮吸收量的变化不仅受配伍药味的影响，药材本身所含成分对其透皮吸收亦有影响；单体、单味中药的透皮情况不能完全反映复方的透皮吸收情况。
, 百拇医药
A Study on Characterisistics of Transdermal Absoption
of Radix Angelieae Sinensis and Its Compound Formula
WEI Li,CAI Zhen-zhen,XU Lian-ying
(Shanghai University of Traditional Chinese Medicine and Pharmay,Shanghai
200032，China)
Abstract：Objective: To investigate the characteristics of transdermal absorption of Radix Angelieae Sinensis and its compound formula.Method: Using Valia-Chien diffusion cell in vitro,and HPLC to determine the content of ferulic acid(FA).Result: The transdermal permeability coefficient (PC)pf FA,which is the main ingredient of Radix Angelieae Sinensis,is greater than that of the monomer (P<0.01):the PC of FA is decreased when Radix Angelieae Sinensis and Salviae Miltiorrhizae are used together (P<0.01):borneol helps enhance the permeation of Radix Angelisas Sinensis (P<0.01);the PC of the compound formula is greeater than that of the compatibility (P<0.01).Conclusion: The transdermal absorption of an ingredient of a traditional Chinese drug is affected not by compatibility,but also by other ingredients of the drug.The transdermal absoption of a monomer or a single drug could not fully mirror the absorption of a compound formula.
, 百拇医药
Key words：Radix Angelieae Sinensis; compatibility; compound formula; transdermal absorption▲
当归为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥根，其性味甘、辛、温，归肝、心、脾经，具补血活血，调经止痛等功效。随着活血化瘀方面研究的深入，当归在心血管方面的作用越来越引起人们的重视，并进行了多方面的实验研究[1]。药理学研究证明，当归的有效成分之一阿魏酸是其活血功效的主要物质基础[2]。本室曾对阿魏酸进行对透皮吸收实验研究[3]。
本实验根据现代药理学研究报道，选择当归的有效成分阿魏酸为指标成分，采用体外透皮吸收实验方法，分别考察单味当归的透皮吸收，当归与常用中药丹参、冰片配伍及三药组成复方后的透皮吸收特性，以探讨中药透皮吸收的特点和相应的规律，为开发当归新的外用制剂奠定理论基础和提供实验依据。
, 百拇医药
1 材料、仪器与试剂
动物 裸鼠，雄性，10周龄(上海肿瘤研究所实验动物中心提供)。
试药 阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)；阿魏酸(上海试剂一厂)；当归、丹参药材(上海徐汇中药饮片厂)；冰片(药用规格，上海试剂厂)。
仪器 高效液相色谱系统(美国Waters系列)；Valia-Chien水平扩散池(中国科学院上海有机化学研究所)；超级恒温仪(上海实验仪器总厂)；多功能磁力搅拌仪(安徽天长市恒运电器厂)。
试剂 高效液相色谱所用甲醇为色谱试剂，其余试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 体外透皮吸收实验方法
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取裸鼠断颈处死，分离剑突下皮肤，小心剔除皮下组织和脂肪，备用。实验时，取离体鼠皮固定于Valia-Chien水平扩散池中间，使角质层面向供给池，供给池中加入一定量的供试液，接收液为5 ml蒸馏水。池内循环水为(37±0.5) ℃，恒速磁力搅拌。加样平衡15 min开始计时，分别于1，2，4，6，8 h……取样，每次取样0.2 ml，同时补充同量蒸馏水。样品用HPLC法测定其阿魏酸含量，所得浓度校正，并以扩散平衡后的校正浓度时间作图，计算渗透系数P(cm.h-1)。具体公式如下：
Cn校=(Cn测+0.2/5∑CP)×稀释倍数
Cn校=PACd t/Vr+截距
其中：Cn校.校正后的药物浓度；Cn测.实际测得的药物浓度；∑CP.该取样点前各点的测定浓度之和；P.渗透系数；A.扩散池横截面积；Vr.接受池中接受液体积；Cd.供给池中供试液药物浓度。
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2.2 色谱分析
接收液的含量用HPLC法直接测定。色谱条件[4]：ALLTIMA C18 5 Micron色谱柱(4.6 mm×150 mm)，流动相甲醇-1%乙酸(55∶45)，流速1.0 ml.min-1，检测波长311 nm，柱温(37±0.1) ℃，进样量10 μl。采用外标法定量。阿魏酸浓度在0.5～10 μg.ml-1与相应的峰面积有良好的线性关系。
回收率试验：在24 h空白皮肤透过液中精密加入一定量的对照品，测定浓度，计算回收率，结果回收率99.76%，RSD 2.15%(n=5)。
2.3 供试品的制备及分组
分别制备单体阿魏酸，单味当归，当归、丹参配伍，当归、冰片配伍，当归、丹参、冰片复方供试品，并测定其中阿魏酸的含量。
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阿魏酸溶液：精密称取一定量的阿魏酸，用20%乙醇配成0.1 mg.ml-1浓度供试液。
单味当归供试品：用水醇法制得当归药材提取液，浓缩后用乙醇调整含醇量至20%，并用20%乙醇调整含量，即得。
当归、丹参配伍供试品：取所制已知含量的当归药材提取液、用回流法制得已知含量的丹参药材提取液适量，分别浓缩，调整含量，混合即得。
当归、冰片配伍供试品：取所制已知含量的当归药材提取液适量，浓缩后用乙醇调整含醇量至20%，再加入20%乙醇配制的冰片溶液，并用20%乙醇调整含量，即得。
当归、丹参、冰片复方供试品：取所制已知含量的当归、丹参药材提取液适量，浓缩后用乙醇调整含醇量至20%，再加入20%乙醇配制的冰片溶液，并用20%乙醇调整含量，即得。
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实验分为以下几组：单体阿魏酸组( 0.1 mg.ml-1)；单味当归药材组(阿魏酸含量为0.1 mg.ml-1)；当归-丹参组(其中阿魏酸、原儿茶醛、丹参酮ⅡA含量均为0.1 mg.ml-1)；当归-冰片组(阿魏酸、冰片含量分别为0.1mg.ml-1和2%)；药材复方组(其中阿魏酸、原儿茶醛、丹参酮ⅡA和冰片含量同前)。
3 研究内容与结果
取各组供试品进行体外透皮吸收实验，当归及其复方所含阿魏酸的渗透系数结果见表1。
表1 当归及其复方所含阿魏酸透皮吸收曲线回归方程及渗透系数 分组
透皮吸收曲线
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回归方程
r
渗透系数P ×10-3
/cm.h-1
阿魏酸
C校=0.086t-0.191
0.9941
4.900±0.817
当归
C校=0.162t-0.699
0.9833
, 百拇医药
9.258±1.513
当归-丹参
C校=0.115t-0.403
0.9862
6.567±0.551
当归-冰片
C校=0.376t-0.544
0.9986
21.474±0.875
药材复方
C校=0.545t-0.530
, http://www.100md.com
0.9996
31.124±1.173
注：n=4
由表1可知，与单一的阿魏酸相比，单味当归、当归-冰片及药材复方所含阿魏酸的渗透系数明显高于同浓度的单体阿魏酸(P<0.01)；当归-丹参组所含阿魏酸的渗透系数无显著性变化(P>0.05)。
与单味当归相比，当归-冰片及药材复方所含阿魏酸的渗透系数明显增加(P<0.01)；当归-丹参所含阿魏酸的渗透系数明显降低(P<0.01)。
与当归-冰片、当归-丹参相比，药材复方所含阿魏酸的渗透系数明显增加(P>0.01)。
4 讨论
本研究结果表明，当归可以透皮吸收，单体与单味药材的透皮吸收不同，单味当归所含阿魏酸与单体阿魏酸在同浓度下的渗透系数有差异，前者约是后者的1.9倍。说明当归药材中其他成分对阿魏酸具有一定的促透作用。
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单味药材的透皮吸收与配伍及组成复方后的透皮吸收不同，如当归、冰片配伍后，当归所含阿魏酸的渗透系数增大，说明冰片可以促进当归中阿魏酸的透皮吸收；当归、丹参配伍后当归所含阿魏酸的渗透系数减少；复方中阿魏酸的渗透系数大于单味药材及配伍药对。
上述结果提示：药材所含某一成分透皮吸收量的变化不仅受配伍药味的影响，药材本身所含成分对其透皮吸收亦有影响；单体、单味中药的透皮情况不能完全反映复方的透皮吸收情况。中药透皮吸收的研究，应从中药自身的特点出发，尽可能以药材的综合性提取物进行研究；对复方透皮吸收的研究应从组方整体出发；用于中药TTS制剂的促透剂，可以外加，也可从组方药味中寻找。
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(95A3312)
参考文献：
[1]阴 健主编.中药现代研究与临床应用(1).北京：学苑出版社，1993.319
[2]林迎晖，陈文为.阿魏酸钠的药理作用及分子改造前景.药学学报，1994，29(9)：717
[3]魏 莉，蔡贞贞，徐莲英.阿魏酸透皮吸收的实验研究.中成药，1998，20(6)：1
[4]陈汉平，刘素香，李桂梅，等.高效液相色谱法测定当归及其炮制品中阿魏酸的含量.中草药，1988，19(10)：15
收稿日期：1998-08-26, 百拇医药
单位：魏莉(上海中医药大学，上海 200032)；蔡贞贞(上海中医药大学，上海 200032)；徐莲英(上海中医药大学，上海 200032)
关键词：当归；配伍；复方；透皮吸收
中国中药杂志000111 摘 要：目的：考察单味当归，当归与常用中药丹参、冰片配伍以及三药组成复方后的透皮特性。方法：以阿魏酸为指标成分，采用体外透皮吸收实验方法和HPLC检测法。结果：当归所含阿魏酸的渗透系数大于单体阿魏酸(P< 0.01)；当归伍用丹参后其所含阿魏酸的渗透系数减小(P< 0.01)；冰片对当归所含阿魏酸具有促透作用(P<0.01)。附方中阿魏酸的渗透系数大于单味当归及当归-丹参、当归-冰片配伍(P< 0.01)。结论：药材所含某一成分透皮吸收量的变化不仅受配伍药味的影响，药材本身所含成分对其透皮吸收亦有影响；单体、单味中药的透皮情况不能完全反映复方的透皮吸收情况。
, 百拇医药
A Study on Characterisistics of Transdermal Absoption
of Radix Angelieae Sinensis and Its Compound Formula
WEI Li,CAI Zhen-zhen,XU Lian-ying
(Shanghai University of Traditional Chinese Medicine and Pharmay,Shanghai
200032，China)
Abstract：Objective: To investigate the characteristics of transdermal absorption of Radix Angelieae Sinensis and its compound formula.Method: Using Valia-Chien diffusion cell in vitro,and HPLC to determine the content of ferulic acid(FA).Result: The transdermal permeability coefficient (PC)pf FA,which is the main ingredient of Radix Angelieae Sinensis,is greater than that of the monomer (P<0.01):the PC of FA is decreased when Radix Angelieae Sinensis and Salviae Miltiorrhizae are used together (P<0.01):borneol helps enhance the permeation of Radix Angelisas Sinensis (P<0.01);the PC of the compound formula is greeater than that of the compatibility (P<0.01).Conclusion: The transdermal absorption of an ingredient of a traditional Chinese drug is affected not by compatibility,but also by other ingredients of the drug.The transdermal absoption of a monomer or a single drug could not fully mirror the absorption of a compound formula.
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Key words：Radix Angelieae Sinensis; compatibility; compound formula; transdermal absorption▲
当归为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels的干燥根，其性味甘、辛、温，归肝、心、脾经，具补血活血，调经止痛等功效。随着活血化瘀方面研究的深入，当归在心血管方面的作用越来越引起人们的重视，并进行了多方面的实验研究[1]。药理学研究证明，当归的有效成分之一阿魏酸是其活血功效的主要物质基础[2]。本室曾对阿魏酸进行对透皮吸收实验研究[3]。
本实验根据现代药理学研究报道，选择当归的有效成分阿魏酸为指标成分，采用体外透皮吸收实验方法，分别考察单味当归的透皮吸收，当归与常用中药丹参、冰片配伍及三药组成复方后的透皮吸收特性，以探讨中药透皮吸收的特点和相应的规律，为开发当归新的外用制剂奠定理论基础和提供实验依据。
, 百拇医药
1 材料、仪器与试剂
动物 裸鼠，雄性，10周龄(上海肿瘤研究所实验动物中心提供)。
试药 阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)；阿魏酸(上海试剂一厂)；当归、丹参药材(上海徐汇中药饮片厂)；冰片(药用规格，上海试剂厂)。
仪器 高效液相色谱系统(美国Waters系列)；Valia-Chien水平扩散池(中国科学院上海有机化学研究所)；超级恒温仪(上海实验仪器总厂)；多功能磁力搅拌仪(安徽天长市恒运电器厂)。
试剂 高效液相色谱所用甲醇为色谱试剂，其余试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 体外透皮吸收实验方法
, http://www.100md.com
取裸鼠断颈处死，分离剑突下皮肤，小心剔除皮下组织和脂肪，备用。实验时，取离体鼠皮固定于Valia-Chien水平扩散池中间，使角质层面向供给池，供给池中加入一定量的供试液，接收液为5 ml蒸馏水。池内循环水为(37±0.5) ℃，恒速磁力搅拌。加样平衡15 min开始计时，分别于1，2，4，6，8 h……取样，每次取样0.2 ml，同时补充同量蒸馏水。样品用HPLC法测定其阿魏酸含量，所得浓度校正，并以扩散平衡后的校正浓度时间作图，计算渗透系数P(cm.h-1)。具体公式如下：
Cn校=(Cn测+0.2/5∑CP)×稀释倍数
Cn校=PACd t/Vr+截距
其中：Cn校.校正后的药物浓度；Cn测.实际测得的药物浓度；∑CP.该取样点前各点的测定浓度之和；P.渗透系数；A.扩散池横截面积；Vr.接受池中接受液体积；Cd.供给池中供试液药物浓度。
, 百拇医药
2.2 色谱分析
接收液的含量用HPLC法直接测定。色谱条件[4]：ALLTIMA C18 5 Micron色谱柱(4.6 mm×150 mm)，流动相甲醇-1%乙酸(55∶45)，流速1.0 ml.min-1，检测波长311 nm，柱温(37±0.1) ℃，进样量10 μl。采用外标法定量。阿魏酸浓度在0.5～10 μg.ml-1与相应的峰面积有良好的线性关系。
回收率试验：在24 h空白皮肤透过液中精密加入一定量的对照品，测定浓度，计算回收率，结果回收率99.76%，RSD 2.15%(n=5)。
2.3 供试品的制备及分组
分别制备单体阿魏酸，单味当归，当归、丹参配伍，当归、冰片配伍，当归、丹参、冰片复方供试品，并测定其中阿魏酸的含量。
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阿魏酸溶液：精密称取一定量的阿魏酸，用20%乙醇配成0.1 mg.ml-1浓度供试液。
单味当归供试品：用水醇法制得当归药材提取液，浓缩后用乙醇调整含醇量至20%，并用20%乙醇调整含量，即得。
当归、丹参配伍供试品：取所制已知含量的当归药材提取液、用回流法制得已知含量的丹参药材提取液适量，分别浓缩，调整含量，混合即得。
当归、冰片配伍供试品：取所制已知含量的当归药材提取液适量，浓缩后用乙醇调整含醇量至20%，再加入20%乙醇配制的冰片溶液，并用20%乙醇调整含量，即得。
当归、丹参、冰片复方供试品：取所制已知含量的当归、丹参药材提取液适量，浓缩后用乙醇调整含醇量至20%，再加入20%乙醇配制的冰片溶液，并用20%乙醇调整含量，即得。
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实验分为以下几组：单体阿魏酸组( 0.1 mg.ml-1)；单味当归药材组(阿魏酸含量为0.1 mg.ml-1)；当归-丹参组(其中阿魏酸、原儿茶醛、丹参酮ⅡA含量均为0.1 mg.ml-1)；当归-冰片组(阿魏酸、冰片含量分别为0.1mg.ml-1和2%)；药材复方组(其中阿魏酸、原儿茶醛、丹参酮ⅡA和冰片含量同前)。
3 研究内容与结果
取各组供试品进行体外透皮吸收实验，当归及其复方所含阿魏酸的渗透系数结果见表1。
表1 当归及其复方所含阿魏酸透皮吸收曲线回归方程及渗透系数 分组
透皮吸收曲线
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回归方程
r
渗透系数P ×10-3
/cm.h-1
阿魏酸
C校=0.086t-0.191
0.9941
4.900±0.817
当归
C校=0.162t-0.699
0.9833
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9.258±1.513
当归-丹参
C校=0.115t-0.403
0.9862
6.567±0.551
当归-冰片
C校=0.376t-0.544
0.9986
21.474±0.875
药材复方
C校=0.545t-0.530
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0.9996
31.124±1.173
注：n=4
由表1可知，与单一的阿魏酸相比，单味当归、当归-冰片及药材复方所含阿魏酸的渗透系数明显高于同浓度的单体阿魏酸(P<0.01)；当归-丹参组所含阿魏酸的渗透系数无显著性变化(P>0.05)。
与单味当归相比，当归-冰片及药材复方所含阿魏酸的渗透系数明显增加(P<0.01)；当归-丹参所含阿魏酸的渗透系数明显降低(P<0.01)。
与当归-冰片、当归-丹参相比，药材复方所含阿魏酸的渗透系数明显增加(P>0.01)。
4 讨论
本研究结果表明，当归可以透皮吸收，单体与单味药材的透皮吸收不同，单味当归所含阿魏酸与单体阿魏酸在同浓度下的渗透系数有差异，前者约是后者的1.9倍。说明当归药材中其他成分对阿魏酸具有一定的促透作用。
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单味药材的透皮吸收与配伍及组成复方后的透皮吸收不同，如当归、冰片配伍后，当归所含阿魏酸的渗透系数增大，说明冰片可以促进当归中阿魏酸的透皮吸收；当归、丹参配伍后当归所含阿魏酸的渗透系数减少；复方中阿魏酸的渗透系数大于单味药材及配伍药对。
上述结果提示：药材所含某一成分透皮吸收量的变化不仅受配伍药味的影响，药材本身所含成分对其透皮吸收亦有影响；单体、单味中药的透皮情况不能完全反映复方的透皮吸收情况。中药透皮吸收的研究，应从中药自身的特点出发，尽可能以药材的综合性提取物进行研究；对复方透皮吸收的研究应从组方整体出发；用于中药TTS制剂的促透剂，可以外加，也可从组方药味中寻找。
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(95A3312)
参考文献：
[1]阴 健主编.中药现代研究与临床应用(1).北京：学苑出版社，1993.319
[2]林迎晖，陈文为.阿魏酸钠的药理作用及分子改造前景.药学学报，1994，29(9)：717
[3]魏 莉，蔡贞贞，徐莲英.阿魏酸透皮吸收的实验研究.中成药，1998，20(6)：1
[4]陈汉平，刘素香，李桂梅，等.高效液相色谱法测定当归及其炮制品中阿魏酸的含量.中草药，1988，19(10)：15
收稿日期：1998-08-26, 百拇医药