双黄连粉针与头孢唑啉伍用效果机理研究
作者：林杉 李仲昆 赵云 李海蜀 宋沧桑
单位：昆明市延安医院药剂科，昆明市 650051
关键词：双黄连粉针；头孢唑啉；协同作用；超微结构；机理
中国药房000110
摘 要：目的：研究双黄连粉针与头孢唑啉协同作用的机制。方法：用试管稀释法测定以上两药单用及合用时对金葡菌的体外最低抑菌浓度(MIC)，并将达MIC试管内的金葡菌用电镜进行超微结构观察。结果：两药合用分别使它们对金葡菌的MIC下降6.7倍和2倍。电镜可见细菌细胞壁、细胞膜破坏明显，内容物流出。同浓度下，合用比单用时细菌结构改变明显。结论：两药合用，对细菌细胞壁等结构的破坏作用显著增强。
中图分类号：R965 文献标识码：B
, http://www.100md.com
文章编号：1001-0408(2000)01-0018-02
Study of Synergistic Mechanism of Shuanghuanglian Injection in Combination with Cefazolin
LIN Shan,LI Zhongkun,SONG Cangsang
(Dept.of Pharmacy,Yanan Hospital of Kunming,Kunming 650051)
ZHAO Yun,LI Haishu
(Dept.of Laboratory Examination,Yanan Hospital of Kunming,Kunming 650051)
, http://www.100md.com
ABSTRACT：OBJECTIVE：To study the synergistic mechanism of Shuanghuanglian injection(SHL)in combination with cefazolin(Cf).METHODS：MICs of two drugs to Staphylococcus aureus(ST) were detected in vitro separately and mixedly with tube-dilution method.The ultrastructure of ST taken from tube with MICs of drugs was observed with electron microscope. RESULTS：The MICs of SHL and Cf in combined use were 6.7 times and twice lower than those in separate use,respectively.Under electron microscope,the damage of cell wall and cytomembrane of ST could be clearly seen and at the same concentration,the damage was more serious in combined use than that in separate use.CONCLUSION：The damaging activity to bacterial cell wall can be enhanced in combined use of two drugs.
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KEY WORDS：Shuanghuanglian injection;cefazolin;synergy;ultrastructure;mechanism▲
双黄连粉针(以下简称双黄连)为植物药制剂，经我们研究得知，它与β-内酰胺类抗生素头孢唑啉钠、头孢噻肟钠、青霉素钠、羟氨苄西林两两伍用时，均能使双黄连及以上抗生素对金葡菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌的体外MIC显著下降；双黄连与头孢噻肟钠合用明显提高了后者对假铜绿单胞菌的敏感度；与苯唑青霉素、头孢唑啉分别合用时，两者对耐苯唑西林金葡菌的敏感度也明显提高，即以上伍用能同时增强双黄连及以上抗生素的抗菌能力[1]。临床研究也支持以上结果，合用者疗程均显著短于单用[2]。为此，我们选择以上伍用中MIC降低最显著的头孢唑啉与双黄连合用于金葡菌组，采用试管稀释法测体外MIC，在其发生MIC变化的临界浓度，采用电镜观察该菌在单用或伍用以上两药时超微结构发生的变化，探讨其协同作用的机制，以利于提高植物药制剂与抗生素的合理使用水平，并对新的抗菌药物研制也将有重要的参考意义。
, 百拇医药
1 实验仪器、材料与方法
1.1 仪器：JEM-100CX电子显微镜。
1.2 材料：(1)细菌：标准金黄色葡萄球菌ATCC259923，本院检验科提供。(2)药物：注射用双黄连，哈尔滨中药二厂提供；注射用头孢唑啉钠，汕头滨制药厂提供。(3)MH肉汤粉：浙江省军区后勤部卫生防疫检验所提供。
1.3 方法：(1)菌液配制：将细菌配成浊度为1.5亿/ml的菌液。(2)药液配制：将药液配成不同浓度梯度，使试管内抗生素浓度为0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64μg/ml。试管内双黄连的浓度分别为0、300、900、6 000μg/ml。(3)MH肉汤：MH肉汤粉27g，加水至1 000ml，加热溶解，121℃、15min灭菌。(4)试验方法：细菌加样量为0.1ml/管。将36只试管分为4横排，每横排9管，编为1号～9号，1号～9号试管内抗生素浓度见1.3(2)。第1横排试管内双黄连浓度为0，第2、3、4横排试管内双黄连浓度分别为300 900、6 000μg/ml，另做1管只加菌液，1管加菌液及双黄连(900μg/ml)。每只试管加MH肉汤至2.0ml，加完后混匀，将试管放入37℃培养箱中孵育24h，取出观察结果。将所需样品管取样作电镜观察。
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2 结果
对标准金黄色葡萄球菌体外MIC试验证明，双黄连与头孢唑啉合用确有协同作用。电镜下观察金葡菌超微结构得知，单用双黄连浓度达6 000μg/ml时，细菌细胞壁、细胞膜均完好，与未用该药时结构无明显异状(见图1、图2)；头孢唑啉浓度在0.5μg/ml时，大部分细菌的相同形态及结构也无改变，个别细菌细胞壁破坏(见图3)。合用时，前者浓度下降至900μg/ml，后者浓度下降至0.25μg/ml，部分细菌细胞质溶解，细胞壁破坏，形态较单用者显著改变(见图4)。
图1 金黄色葡萄球菌形态
图2 金黄色葡萄球菌+双黄连
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图3 金黄色葡萄球菌+头孢唑啉
图4 金黄色葡萄球菌+头孢唑啉+双黄连
3 讨论
3.1 本试验所用测定MIC的方法为稀释法，经肉眼观察试管中溶液开始由浊变澄清者为MIC发生变化的临界浓度。
3.2 体外MIC测定试验结果经电镜下超微结构观察得知，双黄连单用时在体外浓度达6 000μg/ml无抗菌活性，与头孢唑啉合用，浓度为900μg/ml时(下降6.7倍)，相当于绿原酸15μg/ml，部分细菌结构、形态被破坏。据报道，双黄连的抗菌活性机制是在体内经Ig4、T4细胞使免疫功能增强，起到抗细菌感染作用[3]。我们的研究提示，它还可在一定条件下直接进入细菌细胞内作用。这是因为头孢唑啉系β-内酰胺类抗生素，破坏了细菌细胞壁，使双黄连易进入细菌内部并达一定有效浓度，出现单用时所没有的体外破坏细菌的作用。
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3.3 头孢唑啉单用浓度为0.5μg/ml时，金葡菌结构形态大部分完好，仅个别有胞壁破损，与双黄连合用浓度已降低为0.25μg/ml，对细菌的破坏作用还显著增强。头孢噻肟钠、青霉素钠、羟氨苄西林等β-内酰胺类抗生素与双黄连合用，也能使各自的MIC显著下降[1]。提示双黄连增强β-内酰胺类抗生素抗菌活性的机制可能是β-内酰胺类抗生素主要通过与细菌细胞膜上的特殊蛋白PBP或PBP3结合，使细菌产生萎缩变形，逐步溶解死亡。双黄连加强了这种结合能力，并且这种加强作用随双黄连浓度的增加而增加。
3.4 细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的重要机制之一是改变以上受体PBP的结构，使β-内酰胺类抗生素无法与之结合。由于高浓度双黄连与头孢唑啉、苯唑西林分别合用时，甚至能提高两药对耐苯唑西林金葡菌(MRSA)的敏感度[1]，提示双黄连也可能对细菌壁上的PBP受体有竞争性结合而抗菌，从而降低了抗生素的MIC。由于MRSA对所有β-内酰胺类抗生素耐药，是目前国内外抗细菌感染治疗的难题，所以这种协同作用很具临床意义。
, 百拇医药
4 结论
双黄连是含有黄芩苷、绿原酸、连翘苷等多种成分的复方植物提取物的抗感染药物，与头孢唑啉合用，对细菌细胞壁等结构的破坏作用显著增强。它具有与属微生物产物的抗生素及合成抗菌药不尽相同的抗细菌作用机制，并和多种β-内酰胺类抗生素有显著协同作用。探讨这些特点对提高天然抗菌药物和抗生素合理伍用水平，降低细菌耐药性及开发新的抗菌药物很具意义。协同作用的机制还有待更深入研究。■
参考文献：
[1]李仲昆，林 杉，李海蜀，等.双黄连粉针与4种抗生素伍用的体外最小抑菌浓度研究[J].中成药，1999，21(3)：137.
[2]林 杉，李仲昆，黄惠珍，等.双黄连粉针与4种抗生素 的伍用和临床观察[J].中国药房，1998，9(4)：171.
[3]刘树芬，张劭夫.双黄连粉针免疫调节作用的研究[J].中国药房，1995，6(6)：32.
收稿日期：1999-07-06
修回日期：1999-09-13, http://www.100md.com
单位：昆明市延安医院药剂科，昆明市 650051
关键词：双黄连粉针；头孢唑啉；协同作用；超微结构；机理
中国药房000110
摘 要：目的：研究双黄连粉针与头孢唑啉协同作用的机制。方法：用试管稀释法测定以上两药单用及合用时对金葡菌的体外最低抑菌浓度(MIC)，并将达MIC试管内的金葡菌用电镜进行超微结构观察。结果：两药合用分别使它们对金葡菌的MIC下降6.7倍和2倍。电镜可见细菌细胞壁、细胞膜破坏明显，内容物流出。同浓度下，合用比单用时细菌结构改变明显。结论：两药合用，对细菌细胞壁等结构的破坏作用显著增强。
中图分类号：R965 文献标识码：B
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文章编号：1001-0408(2000)01-0018-02
Study of Synergistic Mechanism of Shuanghuanglian Injection in Combination with Cefazolin
LIN Shan,LI Zhongkun,SONG Cangsang
(Dept.of Pharmacy,Yanan Hospital of Kunming,Kunming 650051)
ZHAO Yun,LI Haishu
(Dept.of Laboratory Examination,Yanan Hospital of Kunming,Kunming 650051)
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ABSTRACT：OBJECTIVE：To study the synergistic mechanism of Shuanghuanglian injection(SHL)in combination with cefazolin(Cf).METHODS：MICs of two drugs to Staphylococcus aureus(ST) were detected in vitro separately and mixedly with tube-dilution method.The ultrastructure of ST taken from tube with MICs of drugs was observed with electron microscope. RESULTS：The MICs of SHL and Cf in combined use were 6.7 times and twice lower than those in separate use,respectively.Under electron microscope,the damage of cell wall and cytomembrane of ST could be clearly seen and at the same concentration,the damage was more serious in combined use than that in separate use.CONCLUSION：The damaging activity to bacterial cell wall can be enhanced in combined use of two drugs.
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KEY WORDS：Shuanghuanglian injection;cefazolin;synergy;ultrastructure;mechanism▲
双黄连粉针(以下简称双黄连)为植物药制剂，经我们研究得知，它与β-内酰胺类抗生素头孢唑啉钠、头孢噻肟钠、青霉素钠、羟氨苄西林两两伍用时，均能使双黄连及以上抗生素对金葡菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌的体外MIC显著下降；双黄连与头孢噻肟钠合用明显提高了后者对假铜绿单胞菌的敏感度；与苯唑青霉素、头孢唑啉分别合用时，两者对耐苯唑西林金葡菌的敏感度也明显提高，即以上伍用能同时增强双黄连及以上抗生素的抗菌能力[1]。临床研究也支持以上结果，合用者疗程均显著短于单用[2]。为此，我们选择以上伍用中MIC降低最显著的头孢唑啉与双黄连合用于金葡菌组，采用试管稀释法测体外MIC，在其发生MIC变化的临界浓度，采用电镜观察该菌在单用或伍用以上两药时超微结构发生的变化，探讨其协同作用的机制，以利于提高植物药制剂与抗生素的合理使用水平，并对新的抗菌药物研制也将有重要的参考意义。
, 百拇医药
1 实验仪器、材料与方法
1.1 仪器：JEM-100CX电子显微镜。
1.2 材料：(1)细菌：标准金黄色葡萄球菌ATCC259923，本院检验科提供。(2)药物：注射用双黄连，哈尔滨中药二厂提供；注射用头孢唑啉钠，汕头滨制药厂提供。(3)MH肉汤粉：浙江省军区后勤部卫生防疫检验所提供。
1.3 方法：(1)菌液配制：将细菌配成浊度为1.5亿/ml的菌液。(2)药液配制：将药液配成不同浓度梯度，使试管内抗生素浓度为0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64μg/ml。试管内双黄连的浓度分别为0、300、900、6 000μg/ml。(3)MH肉汤：MH肉汤粉27g，加水至1 000ml，加热溶解，121℃、15min灭菌。(4)试验方法：细菌加样量为0.1ml/管。将36只试管分为4横排，每横排9管，编为1号～9号，1号～9号试管内抗生素浓度见1.3(2)。第1横排试管内双黄连浓度为0，第2、3、4横排试管内双黄连浓度分别为300 900、6 000μg/ml，另做1管只加菌液，1管加菌液及双黄连(900μg/ml)。每只试管加MH肉汤至2.0ml，加完后混匀，将试管放入37℃培养箱中孵育24h，取出观察结果。将所需样品管取样作电镜观察。
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2 结果
对标准金黄色葡萄球菌体外MIC试验证明，双黄连与头孢唑啉合用确有协同作用。电镜下观察金葡菌超微结构得知，单用双黄连浓度达6 000μg/ml时，细菌细胞壁、细胞膜均完好，与未用该药时结构无明显异状(见图1、图2)；头孢唑啉浓度在0.5μg/ml时，大部分细菌的相同形态及结构也无改变，个别细菌细胞壁破坏(见图3)。合用时，前者浓度下降至900μg/ml，后者浓度下降至0.25μg/ml，部分细菌细胞质溶解，细胞壁破坏，形态较单用者显著改变(见图4)。
图1 金黄色葡萄球菌形态
图2 金黄色葡萄球菌+双黄连
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图3 金黄色葡萄球菌+头孢唑啉
图4 金黄色葡萄球菌+头孢唑啉+双黄连
3 讨论
3.1 本试验所用测定MIC的方法为稀释法，经肉眼观察试管中溶液开始由浊变澄清者为MIC发生变化的临界浓度。
3.2 体外MIC测定试验结果经电镜下超微结构观察得知，双黄连单用时在体外浓度达6 000μg/ml无抗菌活性，与头孢唑啉合用，浓度为900μg/ml时(下降6.7倍)，相当于绿原酸15μg/ml，部分细菌结构、形态被破坏。据报道，双黄连的抗菌活性机制是在体内经Ig4、T4细胞使免疫功能增强，起到抗细菌感染作用[3]。我们的研究提示，它还可在一定条件下直接进入细菌细胞内作用。这是因为头孢唑啉系β-内酰胺类抗生素，破坏了细菌细胞壁，使双黄连易进入细菌内部并达一定有效浓度，出现单用时所没有的体外破坏细菌的作用。
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3.3 头孢唑啉单用浓度为0.5μg/ml时，金葡菌结构形态大部分完好，仅个别有胞壁破损，与双黄连合用浓度已降低为0.25μg/ml，对细菌的破坏作用还显著增强。头孢噻肟钠、青霉素钠、羟氨苄西林等β-内酰胺类抗生素与双黄连合用，也能使各自的MIC显著下降[1]。提示双黄连增强β-内酰胺类抗生素抗菌活性的机制可能是β-内酰胺类抗生素主要通过与细菌细胞膜上的特殊蛋白PBP或PBP3结合，使细菌产生萎缩变形，逐步溶解死亡。双黄连加强了这种结合能力，并且这种加强作用随双黄连浓度的增加而增加。
3.4 细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的重要机制之一是改变以上受体PBP的结构，使β-内酰胺类抗生素无法与之结合。由于高浓度双黄连与头孢唑啉、苯唑西林分别合用时，甚至能提高两药对耐苯唑西林金葡菌(MRSA)的敏感度[1]，提示双黄连也可能对细菌壁上的PBP受体有竞争性结合而抗菌，从而降低了抗生素的MIC。由于MRSA对所有β-内酰胺类抗生素耐药，是目前国内外抗细菌感染治疗的难题，所以这种协同作用很具临床意义。
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4 结论
双黄连是含有黄芩苷、绿原酸、连翘苷等多种成分的复方植物提取物的抗感染药物，与头孢唑啉合用，对细菌细胞壁等结构的破坏作用显著增强。它具有与属微生物产物的抗生素及合成抗菌药不尽相同的抗细菌作用机制，并和多种β-内酰胺类抗生素有显著协同作用。探讨这些特点对提高天然抗菌药物和抗生素合理伍用水平，降低细菌耐药性及开发新的抗菌药物很具意义。协同作用的机制还有待更深入研究。■
参考文献：
[1]李仲昆，林 杉，李海蜀，等.双黄连粉针与4种抗生素伍用的体外最小抑菌浓度研究[J].中成药，1999，21(3)：137.
[2]林 杉，李仲昆，黄惠珍，等.双黄连粉针与4种抗生素 的伍用和临床观察[J].中国药房，1998，9(4)：171.
[3]刘树芬，张劭夫.双黄连粉针免疫调节作用的研究[J].中国药房，1995，6(6)：32.
收稿日期：1999-07-06
修回日期：1999-09-13, http://www.100md.com